石蜡切片的基本操作流程
一、取材选取目的组织块,修剪到合适的大小;
二、固定
将组织块放入福尔马林固定液(10%甲醛溶液),固定时间由组织块大小而定,一般不少于24h;体积1cm3的组织块,一般为3-7天;
三、冲水自来水洗几下,泡1小时;
四、系列酒精脱水
50%酒精,1h;
70%酒精,1h;
80%酒精,1h;
90%酒精,1h;
100%酒精(I),1h;
100%酒精(II),1h;
五、透明
酒精:二甲苯=1:1溶液,过夜;
二甲苯,1h;
六、包埋
二甲苯:石蜡=1:1,65-70 ℃,2h;
新鲜石蜡(I),65-70 ℃,1h;
新鲜石蜡(II),65-70 ℃,4h;
新鲜石蜡包埋;
七、切片切片厚度为5-7um;
八、展片温水(40-42 ℃)展片;
九、捞片将展好的片子贴于载玻片上;
十、烘片42 ℃将片子上的水烘干;
十一、烤片60 ℃烤片12-24h;
十二、脱腊
二甲苯(I):2min;
酒精:二甲苯=1:1溶液:2min;
十三、水化
100%酒精(I):1min;
100%酒精(II):1min;
95%酒精:1.5min;
80%酒精:1.5min;
70%酒精:1.5min;
50%酒精:1.5min;
自来水洗:2min
十四、H&E染色
Hematoxylin染色3-5min(2.5min时取出观察染色效果),自来水洗3次,盐酸分化(2/3杯玻璃缸+3滴1N盐酸),10s;自来水洗蓝化,镜下观察染色效果;(伊红)Eosin染色30-50s,直接脱水(90%酒精-----100%酒精I,100%酒精II各1分------酒精:二甲苯=1:1溶液:1-1.5min);十五、脱水
90%酒精-100%酒精-100%酒精,各1min;
十六、透明
二甲苯:酒精:1-1.5min;二甲苯:2min;
十七、封片
中性树胶封片;
十八、镜下观察并拍照。