（3）供试品阳性对照液（B）的制备 取1.0ml供试品，加入1.0ml上述C溶液即得。 （4）阴性对照（D）的制备
直接使用BET水。
取8只鲎试剂，分别加0.1mLBET复溶，在分别加入A、 B、C、D组溶液各0.1mL （每组2管） 。加样结束后，用 封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，放入
37℃±1℃恒温器中，保温60±2分钟，观察并记录结果。
利用鲎试剂与微量内毒素产生凝集反应的 现象，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否 符合规定的一种方法。
旋涡混合器 鲎试剂（λ=0.5EU/ml） 恒温水浴器（37℃±1℃） 细菌内毒素工作标准品 精密移液枪 无热原吸头（100μL、 1mL） （CRE，10EU） 细菌内毒素检查用水（BET） 安瓿架 封口膜 5%葡萄糖注射液 脱脂棉和无菌纱布 标签纸和记号笔 剪刀 表
供试品细菌内毒素的检查
按下表制备溶液A、B、C和D。
编号 A 内毒素浓度/配制内毒素 的溶液 无/供试品溶液 平行管 数 2 供试品溶液
B
C
2λ/供试品溶液
2λ/检查用水
2
2
供试品阳性对照
阳性对照
D
无/检查用水
2
阴性对照
（1）供试品溶液（A）的配制
取供试品1.0ml，加入1.0ml的BET水，即得供试品溶 液。 （2）阳性对照液（C）的配制 用BET水将CSE制成 2λ浓度的内毒素溶液。
供试品Leabharlann 供试品阳性对照阳性对照阴性对照
1号 2号
结果是否有效 结果判断
1号 2号
1号 2号
1号 2号
思考题
（1）试验设置阳性对照、阴性对照的意义是什么？ （2）试验中如果出现阴性对照为阳性，该如何处理？ （3）供试品阳性对照液如何配制？
（4）凝胶法细菌内毒素检查应注意哪些事项？
凝胶限度试验（简单、经济、应用广泛，
《中国药典》的“仲裁”方法）
根据2010版《中国药典》二部“葡萄糖注射液”检 查项下“细菌内毒素”的规定，其限值（L）为0.5EU/ml。
已知：L为0.5EU/ml，c为1.0ml/ml，鲎试 剂灵敏度 λ=0.5EU/ml。
MVD=cL/λ=0.5/0.5=1
结果判断
当阳性对照和供试品阳性对照都为阳性，且阴性对照 都为阴性时，试验方有效。 若供试品2管均为阴性，认为该供试品符合规定；如供 试品2管均为均为阳性，应认为不符合规定；如2管中1管阳
性，1管阴性，则另取4支供试品管复试，4管中如有1管为
阳性，即认为不符合规定。 若第一次试验时供试品的稀释倍数小于MVD而结果出 现2管均为阳性或2管中1管为阳性时，按同样方法复试，复 试时要求将稀释至MVD。