LIPOFECTAMINE 2000转染试剂转染步骤
24孔板贴壁细胞的瞬时或稳定转染实验步骤：
（在生长培养基中直接加入复合物）
1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，将细胞转至24孔板，控制密度使其在转染日密度接近90%。

细胞铺板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。

2.对于每孔细胞，使用50μl OPTI-MEMⅠ培养基稀释1μl-3μl LIPOFECTAMINE 2000试剂。

温柔混匀LIPOFECTAMINE 2000，室温温浴5分钟
（在5-25分钟内同稀释的DNA混合。

保温时间过长会降低活性。

可以批量制备。

）
注意：即使LIPOFECTAMINE 2000使用OPTI-MEMⅠ稀释，细胞也可以使用D-MEM培养。

3.对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.8μg-1.0μg DNA。

多孔操作可以批量制备。

4.混合稀释的DNA（由第3步）和稀释的LIPOFECTAMINE 2000（由第2步）。

在室温保温20分钟。

注意：溶液可能会混浊，但不会影响转染。

复合物可以在室温保持6小时稳定。

5.直接将复合物（100μl）加入到每孔中，前后（或左右）摇动培养板，轻轻混匀。

注意：如果在无血清条件下转染，使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。

在加入复合物前移去生长培养基，替换为0.2ml无血清培养基。

6.在37℃，5％的CO2中保温18-48小时，无须去掉复合物或更换培养基或者在4-5小时后更换生长培养基也不会降低转染活性。

7.在细胞中加入复合物18-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。

这依赖于细胞类型和启动子活性。

对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中（1：10），两天后加入筛选抗生素。

进行稳定表达需要数天或数周。