苏州大学实验报告
院、系医学部年级专业姓名学号
课程名称医学免疫学实验成绩
指导老师葛彦同组实验者实验日期 2020/6/3
六、思考题
1.阐述脾脏细胞和骨髓瘤细胞融合后的五种状态，以及在HAT选择性培养基里生存与否的原理。

1)五种状态：未融合的B细胞；未融合的骨髓瘤细胞；B细胞融合B细胞；骨髓瘤细胞融合骨
髓瘤细胞；B细胞融合骨髓瘤细胞。

2)生存与否的原因
B细胞无法在体外长期大量生存，故未融合的B细胞和B细胞相互融合都无法在HAT选择性
培养基生存；
骨髓瘤细胞和骨髓瘤同核融合细胞在HAT培养液中时，DNA合成的主要途径被A阻断，由于缺乏HGPRT或/及TK，不能利用培养基中的H及T，无法完成DNA的合成；
B细胞和骨髓瘤细胞的异核融合体即杂交瘤细胞，既从B细胞获得了HGPRT和TK，从而利用培养液中的H和T合成DNA，又从骨髓瘤细胞获得了无限增殖的能力，因此，只有杂交瘤细胞能在HAT选择培养液中生存下来。

2.现需要利用杂交瘤技术制备鼠抗人CD3单克隆抗体，请设计一个实验计划，阐述各阶段的实验
方案和过程，以及所需的实验材料
1)实验材料
人CD3抗原、小鼠、小鼠骨髓瘤细胞、细胞融合剂、PBS、HAT培养液、120目钢丝筛网、
玻璃平板、96孔细胞培养板、温控离心机。

2)实验方案和过程
a)将人CD3抗原注入小鼠体内，进行几周加强免疫；
b)取小鼠脾脏
处死小鼠，固定于解剖架上打开腹腔，取出脾脏。

置于120目的钢丝网中，将网移入
盛有生理盐水的平皿中，轻轻压磨，使其成为单个细胞悬液，吸取细胞悬液，与骨髓
瘤细胞SP2/0按比例混合，离心后弃上清；
c)用HAT培养基培养纯化，得到杂交瘤细胞，使其产生抗人CD3单克隆抗体。