吖啶橙荧光染色法
【实验原理】
吖啶橙(acridine orange, A0)是最经典的极灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染
色而显示不同颜色的荧光。

其激发峰为492nm，荧光发射峰为530nm (DNA )、640 ( RNA )，它与双链DNA
的结合方式是嵌入双链之间，而与单链DNA和RNA则由静电吸引堆积在其磷酸根上。

在蓝光( 502nm) 激发下，细胞核发亮绿色荧光(约530nm)，核仁和胞质RNA发橘红色荧光(>580nm)。

吖啶橙的阳离子
也可以结合在蛋白质、多糖和膜上而发荧光，但细胞固定阻抑了这种结合，从而主要显示DNA、RNA两
种核酸。

【实验用品】
1、器材
荧光显微镜、牙签、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸。

2、试剂
(1)0.1mol/l pH7.0 PBS 液
A 液：NaH2PO4・H2O 2.76g，加蒸馏水至100ml;
B 液：Na2HPO4 • 7H2O 5.36g，加蒸馏水至100ml;
取A 液16.5ml + B 液33.5ml + NaCl 8.5g，用蒸馏水稀释至100ml。

(2)1%吖啶橙原液
取0.1g吖啶橙加蒸馏水稀释至100ml (临用时配制0.01%吖啶橙染液：将1%吖啶橙原液用pH7.0 PBS溶液稀释10倍)。

3、材料
口腔黏膜上皮细胞临时制片或人肝癌BEL-7402细胞爬片。

(1 )取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上。

(2)95%乙醇溶液固定5min。

(3)滴加0.01%吖啶橙染液5min。

(4)盖上盖玻片，吸水纸吸去盖玻片周围多余液体，镜下观察。

【结果与观察】
荧光显微镜下(选用蓝色激发滤片)，可见含DNA的细胞核显示黄绿色荧光，含RNA的细胞质及核仁显
示橘红色荧光
【注意事项】
(1 )制片后一定要晾干玻片，在进行后续步骤，否则会导致细胞脱落。

(2)每种荧光染料，均有自己的最适pH,此时荧光最强。

当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长
将有所改变，因此荧光检测时要在一定的pH缓冲液中进行。