中孕期（15-22周）
→AFP、free ß-hCG（或hCG)二联筛查 目标疾病：Down综合征，18-三体征， 神经管缺损
早孕期（7-13周）
→PAPP-A、hCG（或free ß-hCG）二联筛查 目标疾病：Down综合征
DS——→AFP free ß-hCG uE3 PA2.4 MOM
胎儿遗传病的孕妇血清学筛查
常用的血清标志物有
AFP hCG（或 free ß-hCG） uE3 PAPP-A
MOM?
中位数值的倍数： 指产前筛查中，孕妇个体的血清标志物 的检测结果是正常孕妇群在该孕周时血清标 志物浓度中位数值的多少倍。
唐筛检查?
通过化验孕妇的血液，来判断胎儿 患有唐氏综合征的危险程度。
4P部分三体综合征
4P
部 分 三 体 综 合 征
部分三体综合征
部分三体是指某条染色体的某一区带有重复 已报道1-22号染色体都有部分三体病例 多数在胚胎期流产或在婴儿期夭折
§2 核酸和基因相关检验
➢ 聚合酶链式反应（PCR） ➢ 实时荧光PCR技术 ➢ 核酸分子杂交技术 ➢ 限制性酶切 ➢ 凝胶电泳技术
二、荧 光 P C R
荧光共振能量传递（FRET Probe）
Oligo 1: Fluorescein Excitation
Transfer
Oligo 2: LC Red 640 Emission
双标记探针（Taqman Probe）
5’
3’
5’
3’
3’
5’
Excitation
Excitation
临床遗传学与分子生物学 实验诊断
南方医院实验诊断学教研室
§1 染色体病检查 §2 核酸和基因相关检验 §3 产前诊断 §4 新生儿疾病筛查
§1 染色体病检查
人类染色体数目或结构畸变导致的遗 传性疾病称染色体病。
共同的临床特征：
先天性多发畸形、智力低下、生长发育迟缓和皮 肤纹理改变。性染色体异常的患着还将出现性发育不
R
Q
Q
3’
5’
FQ-PCR反应原理
• 特异性荧光 双标记探针
• Taq酶 5’→3’ 外切酶活性
荧 光 PCR 仪
FQ-PCR实时动力学曲线
FQ-PCR的技术特点
封闭状态下检测，避免了扩增产物污染而致的假阳 性
可定量检测，扩展了临床应用空间 光谱技术进一步提高了灵敏度—可检测单拷贝基因 荧光探针杂交，进一步提高了特异性 扩增与自动分析一体化，检测更加简便快速
三、核酸分子杂交技术
核酸分子杂交？ 常用的核酸分子杂交技术及应用
常用的核酸分子杂交技术
Southern印迹杂交--DNA印迹 Northern印迹杂交--研究RNA的方法 斑点杂交--狭缝杂交。DNA、RNA均可检测 原位杂交--检测DNA或RNA同时还可对其进
行细胞及基因组内定位
§3 产前诊断
PCR检测流程
DNA
病 裂解
原 体
抽提
RNA
PCR
扩
增
产
物
检
RT-PCR
测
凝胶电泳 酶切分析
杂交 核酸序列分析
核酸纯化
PCR扩增及产物分析
PCR产物电泳图
p
1 2 3 4 Marker
270 bp
PCR的技术特点
特异性强(几乎没有方法学的假阳性) 灵敏度高 简便快速 对样品要求低 PCR的局限性
全及内、外生殖器异常或畸形。
谁需要做染色体检查？
1. 高龄孕妇，尤其是40岁以上孕妇 2. 曾有异常新生儿或胎儿的孕妇 3. 无症状异常基因携带或基因缺失的夫妻 4. 易患某种遗传病的特殊人群 5. 曾有接触、暴露或服用致畸物质的孕妇
染色体检查的基本步骤
取材：主要采取外周血白细胞、绒毛组织、羊水细 胞、脐血等
一、聚合酶链式反应（PCR)
PCR？ PCR的原理 PCR的技术特点
PCR
(Polymerase Chain Reaction)
聚合酶链式反应
是模拟DNA体内 复制过程，在DNA聚 合酶作用下，进行 特定DNA片段的体外 复制。
引物
5’
3’
3’
5’
变性、复性
延伸
变性、复性
延伸
PCR扩增原理
细胞培养：加入丝裂原获分裂细胞，制成染色体标 本
显微镜下进行初步的染色体观察和分析照相并进行 核型分析
讨论分析结果并作出诊断报告
染色体图象分析系统
正常女性核型图
唐氏综合征核型图
唐 氏 综 合 征 患 者
唐氏综合症
按照核型分为：完全型、易位型、嵌合型 发生率约1／660,男多于女。我国大约每20分钟就有一位唐
氏儿出生。 出生风险率随孕妇年龄增加而加大，尤其40岁以上。 60％患儿在胎儿早期即夭折流产。 第一个被确诊的人类染色体病。
Turner综合征核型图
综 合 征 患 者
Turner
Turner综合征
➢ X单体综合征；先天性卵巢发育不全综合征 ➢ 发病率约占女婴1/5000。在自发流产中高达7.5% ➢ 原发闭经患者中占1/3
➢
44岁----1/39
应注意的几个问题
唐氏筛查值是修正值。影响唐氏筛查值的因素主要有：孕 妇年龄，体重、孕周，是否胰岛素依赖性糖尿病、双胎， 是否吸烟，异常妊娠史等
唐筛检查可筛检出60--70%的唐氏患儿。 唐氏筛查为可能性检查：高危人群只是说胎儿更有可能是
谁会生出“唐氏儿”？
唐氏综合征是一种偶发性疾病，所以每一个怀 孕的妇女都有可能生出“唐氏儿”。生唐氏儿的几 率会随着孕妇年龄的递增而升高。唐氏筛查一定要 做。
孕妇年龄与唐氏患儿出生风险率 的关系
➢
20岁----1/1477
➢
30岁----1/939
➢
35岁----1/353
➢
40岁----1/85
是在遗传咨询的基础上，应用现代生物学、生 物化学、免疫遗传学、细胞遗传学、分子遗传学技 术对胚胎和胎儿的直接检测，或通过母体的检查， 预测胎儿在宫内的生长发育情况，诊断胎儿是否有 遗传缺陷及先天畸形。
一、产前筛查
采用简便、可行、无创的检查方法，对 发病率高、病情严重的遗传性疾病或先天畸 形进行产前筛查，筛出可疑者再进一步确诊
0.7 MOM
明显降低
18三体征-→free ß-hCG≤0.25 MOM
NTD——→AFP≥2.5 MOM
临床意义
Down综合征 风险率≥1/270
18三体征
风险率≥1/350
NTD------------ AFP≥2.5MOM
结合孕妇的年龄、体重、孕周计算得出胎儿罹患某一 遗传性疾病的风险率。