流式细胞仪操作规程目录
1:淋巴细胞亚群测定及绝对计数
2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T得检测
3：HLA—B27测定
4:CＤ55/CＤ59测定
5：干细胞检测与绝对计数
6：白血病免疫分型测定
7:淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN－γ/IL—4测定８:细胞周期分析
９:活化血小板检测
10:血小板抗体测定
11:红细胞抗体测定
１2:粒细胞抗体测定
淋巴细胞亚群测定
（流式细胞仪）
医院检验科
操作规程文件号:
200 年月日起实施
第1版
(共3页)
本规程每2年复审一次
复审日期: 年月日
复审人:
规程编写者:
审批者：
批准日期：年月日文件分发部门与／或个人
院档案室保管者:
检验科主任:
检验科实验室：
淋巴细胞亚群测定
方案（Proｔocol）1、选参数
4色点击
点击
3色
点击
（命名，点击savｅ) 2、画图
结果
此图为CD45圈门
如果做绝对计数，则
填写Flow-Count得浓度
选中cell/ul即可
方法
流式细胞仪(ＢｅckmaｎCouｌter，贝克曼库尔特）
原理：
双／三色直接免疫荧光法.荧光素标记得各种单克隆抗体加入到全血中，与白细胞膜上相应得抗原结合,经过溶血、洗涤（与固定）等步骤后,在流式细胞仪上进行分析，从而得到相应各亚群得百分数.活化淋巴细胞表面抗原为CD3+/C Ｄ25＋与CD3+/HLA—DR＋。
CD3+／CＤ45RO＋就是记忆型T细胞.CD3+/ＣD45R Ａ＋就是纯真型T细胞.
HLA—B２７测定
点击
点击
键入文件名，点击Saｖe 2、画图
结果
1、positive (＋)
X-Ｍean=１7、1
2、nｅgａtive(—）
Ｘ—Meaｎ=1、2X－Ｍeａn=5、８
CD55／CD59测定
方案（Pｒotocｏｌ)（同HLＡ-B2７)
结果
1、RBC：ｎｏrmaｌ
２、RBC：abnoｒmal
３、WＢC
干细胞检测与绝对计数
方案(Pｒoｔocｏl）同淋巴细胞亚群检测结果(Rｅsuｌt）
白血病免疫分型测定
正常参考值
Ｔhl（IFN－γ):17、3９±5、５２％ Th２（ＩL－4)：１、50±0、44％
ThO :0、51±０、26％
临床意义
淋巴细胞均分泌多种细胞因子:Thl细胞主要分泌IL－2,IL－１２,IFN—γ与TNF－b/a等，Tｈ2细胞主要分泌IＬ—4。
ＩL－5.IＬ-6，IFN-γ为Ｔhl最特异分泌得细胞因子，IL—４为Th２最特异分泌得细胞因子,所以可根据分泌得细胞因子来区分Ｔhl与Ｔh2。
Thl为IＦＮ-γ+，Th2为ＩＬ—４+.静息状态(人得正常生理状态、即未受到任何刺激下Ｔh0分化为Thl与Th2得能力非常弱，在外周血中仅含有极少量得Ｔｈｌ与Th２细胞,这时我们所能检测得胞内得I ＦN-γ与IL－4也微乎其微。
当Th细胞受到外界因素，如刺激素、病原体等刺激,其中Th0即会向Thl或Th2大量分化,此时我们检测到得IＦＮ-γ与IL-4也较多。
本实验得检测实际上就是检测Tｈ细胞对刺激素刺激得反应能力。
方案(Proｔocol）
细胞周期分析
方案(Proｔocｏｌ)
1、选参数
选择Cyｔometer Control点击Pａrａmetｅｒs后
2、画图
结果（Ｒesuｌt）
操作：
富集血小板法:
1）800r/min*１5ｍｉn，取上清,
２)加4－5ml鞘液,２000r/min＊3mｉｎ，弃上清,重复一次。
3) 分别向试管中加入准备好得10u1含血小板得PBＳ（血小板得量约为10６)
（血小板若在正常范围，稀释到原量直接取10ｕ1。
）。
4) 分别向已编好号得试管中依次加入一抗与二抗(设对照)
５）混匀，避光，室温孵育2０-30分钟
6）洗或不洗，上机测样
全血法：
1）加4—5ｍl鞘液,150０ｒ/miｎ*1５miｎ，弃上清,后同上3）－６）
报告结果
报告百分数
操作性能
精密度批内五次重复CV〈２％
参考值
ＩgA〈２、98% IgG<３、04%
IgＭ<３、0％ＩｇＤ<2、91％
临床意义
为免疫性血小板减少性紫癜（IＴP)诊断、治疗、预后估计得重要指标，在IT Ｐ、胶原性疾病时升高.
方案（Pｒotocol）
红细胞膜蛋白结构测定
（红细胞抗体）
操作：
１）分别向试管中加入混匀得1００u１抗凝血（1：200稀释后）。
２) 按照要求,分别向已编好号得试管中依次加入一抗与二抗（设对照）3)混匀，避光,室温孵育20－30分钟
4）上机测样
报告结果
报告百分数
操作性能
精密度批内五次重复CV<2%
参考值
IgA<2、７８％ IgG<2、98%
IgM<2、52％ IgD<2、8８％
临床意义
自身溶血性贫血得分型诊断
方案（Proｔocoｌ)
方法
流式细胞仪（ＢeckmanCoulter，贝克曼库尔特)
操作:
1）溶血:a、 OpｔiＬyse C（按说明书步骤溶血)
b、使用CＯULTER Q—PREP制备系统
开机－-－显示RＥADY灯亮——-选择３5SEＣ灯亮—－—开门—
——放入试管关门－—－自动进行溶血-—-显示RＥADY灯亮—
--开门-——取出试管—－-再进行下一个样品测定。
（＊溶血前确认A/B／C管路充满并能打出液体）
2）分别向试管中加入经溶血处理得样本１０0ｕ1。
3）分别向已编好号得试管中依次加入一抗与二抗(设对照)
4)混匀，避光，室温孵育20－30分钟,洗涤离心
5)上机测样
报告结果
报告百分数
操作性能
精密度批内五次重复ＣV<2％
参考值
ＩgA＜2、68% ＩgG<2、６６%
IｇＭ<2、４9％ＩｇD〈3、4%
临床意义
白细胞减少症得分型诊断，大多数白细胞减少症患者抗体为阳性
方案（Protｏcoｌ）。