3.5～5.0 6.0～7.0
白细胞的影响
一般情况下，实际影响较小，可忽略不计；
白细胞过高者（WBC＞100×109/L），应校正。
实际红细胞数=RBC－WBC；
高倍镜下注意识别，计数时勿将白细胞计入。
二、血红蛋白测定
血红蛋白组成
4条珠蛋白肽链
4个亚铁血红素分子
按不带氧计算，血红蛋白分子量为64458。
（三）血红蛋白测定方法及评价
血红蛋白测定，即测定血液中各种血红蛋白的 总浓度。 氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法 十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白 目前常用方法 （SLS-Hb）测定法 碱羟血红蛋白（AHD575）测定法 叠氮血红蛋白（HiN3）测定法 溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血红蛋白测定法 血细胞分析仪法
主要成分及作用： NaCl 枸橼酸钠 甲醛 调节渗透压； 调节渗透压，抗凝； 防腐；
蒸馏水
优点：配制简单，可使红细胞在稀释后较长 时间保持正常形态并且不凝集，故应用较广。
③普通生理盐水或加1%甲醛的 生理盐水
急时用。
参考值
红细胞数（×1012/L） 成年男性 4.0～5.5
成年女性 新生儿
成年女性RBC＞5.5×1012/L,Hb＞160g/L
RBC和Hb减少
红细胞和血红蛋白低于参考值的下限，为红细 胞和血红蛋白减少，通常称贫血。
作业
红细胞计数时如遇WBC过高，应如何校正？
血红蛋白测定的原理、步骤、参考值、临床 意义及注意事项？
血红蛋白测定方法及评价
血红蛋白测定，即测定血液中各种血红蛋白的 总浓度。 氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法 十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白 （SLS-Hb）测定法 碱羟血红蛋白（AHD575）测定法 叠氮血红蛋白（HiN3）测定法 溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血红蛋白测定法 血细胞分析仪法
A为测定管吸光度
44为毫摩尔消光系数
64458/1000为1mmol/LHb溶液中所含Hb克数 251为稀释倍数
⑷优缺点

优点
ICSH和WHO推荐的参考方法； 操作简便、结果稳定可靠； 除SHb外其它Hb衍生物均可检测； 读取吸光度后可直接定值。

缺点
试剂中含剧毒药氰化钾； 不能测定SHb，对HbCO转化较慢； 遇高球蛋白或高白细胞血症试剂易混浊。
实验五
一、红细胞显微镜计数 二、血红蛋白测定
一、红细胞计数
红细胞计数 指测定单位体积血液ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
中红细胞的数量。

显微镜计数法

血细胞分析仪法
（三）红细胞计数方法
红细胞计数 指测定单位体积血液
中红细胞的数量。

显微镜计数法（本节主要学习）

血细胞分析仪法
1.红细胞显微镜计数法
用等渗稀释液将血液稀释一定的倍 数后，滴入计数板，在显微镜下计数一 定范围内红细胞数，经换算可求得每升 血液中的红细胞数。
1983年全国临床检验方法学学术会议推荐采用文齐氏液。
组成及作用:
K3Fe(CN)6 KCN KH2PO4 非离子表面活性剂 氧化作用 提供CN－离子 缓冲液 破坏红细胞，防止混浊
特点
pH7.2±0.2，Hb转化快，5min即可完成，非离子表 面活性剂可防止试剂混浊。
⑶计算公式
A 64458 ×251 =A×367.7 Hb(g/L)= 44 × 1000
废液处理
水1：1稀释废液
加入次氯酸钠35ml/L
敞口放置15h以上
CN－氧化成CO2、N2挥发 排入下水道
CN－水解成CO32-、NH4+
参考区间
成年男性 120～160g/L
成年女性
110～150g/L
新生儿
170～200g/L
临床意义
RBC和Hb增多
成年男性RBC＞6.0×1012/L,Hb＞170g/L
氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法
⑴原理
血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外 各种血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红 蛋白（Hi）， Hi再与试剂中CN-结合生成稳定的 棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。 HiCN在 540nm处有一吸收峰。根据标本的吸光度，即可 求得血红蛋白的浓度。
转化液
红细胞稀释液

Hayem液 枸橼酸钠稀释液
普通生理盐水或加1%甲醛的生理盐水
①Hayem液
主要成分及作用： NaCl Na2SO4 HgCl2 调节渗透压； 调节渗透压，提高比重防止细胞粘连； 防腐；
蒸馏水
缺点：遇高球蛋白血症患者，由于蛋白质沉淀而
使红细胞易凝集。
②枸橼酸钠稀释液
亚铁血红素
无种属特异性； 由Fe2+和原卟啉组成； 铁原子位于卟啉环中央，具 有6条配位键； 其中4条与原卟啉中心的4个 吡咯环氮原子连接； 另2条配位键与血红素分子 平面垂直，分别与平面两侧 的配体（ 1个珠蛋白肽链， 1个O2）连接。
血红蛋白及其衍生物

氧合Hb（Hb02）：呈鲜红色； 还原Hb（Hbred）：呈暗红色； 碳氧Hb（HbCO）：呈樱桃红色； 高铁Hb（Hi）：呈红褐色； 氰化高铁Hb（HiCN）：呈棕红色，540nm处有一较 宽吸收峰。