氨基酸的纸层析法
一、实验目的
了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。

二、实验原理
以滤纸为支持物的层析法，称为纸层析法。

纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。

展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。

有机溶剂在滤纸上又下向上移动的，称为上行法；有上向下移动的，称为下行法。

将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。

在一定条件下（室温、展层剂的组成、滤纸的质量、PH值等不变），不同的氨基酸有固定的移动速率（Rf值）
Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。

用混合氨基酸做样品时，如果只用一种溶剂展层，由于某些氨基酸的移动速率相同或相近，就不能将它们分开，为此，当用一种溶剂展层后，可将滤纸旋转90度，以第一次所的层析点为原点，在用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。

这种方法称为双向层析法。

本试验主要介绍的是单向层析法。

其中混合氨基酸有甘氨酸、苯丙氨酸组成。

三、实验仪器
1、新华滤纸
2、层析缸
3、细线
4、点样管
5、橡皮筋
6、电吹风
7、喷雾器
四、实验试剂
1、混合氨基酸
2、展层剂：正丁醇：12%氨水：95%乙醇：蒸馏水=13：3：3：1（v:v）
3、0.5%茚三酮—无水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml无水丙酮，贮于棕色瓶中
五、实验步骤
1、取滤纸剪成20×10厘米的滤纸条一张，在一端打孔，系一根细线，在另一端2~3cm处用铅笔画一横线，中间画两个圆点（原点）。

2、取毛细管一支(回收)，吸取氨基酸混合液，在上面两个点处点样，样点直径不宜超过5mm,每点一次用吹风机吹干，点2~3次为佳。

3、点样后将滤纸放入层析缸中展层，注意点样线要高于层析液面，滤纸不要贴在层析缸璧上，当展层至另一端1~2cm处时，停止展层（大约2~3小时）。

4、取出滤纸，用铅笔记下溶剂前沿，然后用热风吹干（或烘箱60℃）烘干。

5、均匀喷上茚三酮—无水丙酮液，注意使溶液不倒流，不间断。

6、用吹风机吹干，观察层析点，确定其几何中心。

7、量取数值，计算各自的Rf值，与表中标准氨基酸Rf值比较，确定样品氨基
酸种类。

六、实验结果
Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离
测量得出：
几何中心距底线距离H=12.38cm
H1=7.34cm H2=3.08cm H3=0.75cm
所以根据公式可以得出：
Rf1=H1/H=7.34/12.38=0.5929 苯丙氨酸
Rf2=H2/H=3.08/12.38=0.2488 酪氨酸
Rf3=H3/H=0.75/12.38=0.0694 精氨酸
七、实验分析
1、影响本次实验的因素有哪些？
点样线不能被没于层析液面，滤纸不能贴到容器壁上，点样时要一边点样一边用电吹风吹干，喷茚三酮—无水丙酮液时注意使溶液不倒流不间断。

室内温度会影响流速，所以温度要注意保持一致。