临床几种抗癫痫新药的疗效副作用的动物实验窦立敏1，杨天明1，张世明21东南大学临床医学院，南京（210009）2苏州大学附属第一医院，苏州（215006）E-mail：limindou1976@摘要：目的探讨临床较常用的几种抗癫痫新药奥卡西平、拉莫三嗪，妥泰单药治疗、长期使用，用传统抗癫痫药苯妥英钠对照，观察对于慢性颞叶癫痫大鼠的疗效与副作用。
方法使用海仁酸制作成慢性颞叶癫痫的大鼠模型,临床常用维持剂量的苯妥因钠,奥卡西平、拉莫三嗪、妥泰根据成人体重转换为大鼠剂量分别为37.50mg/Kg,125mg/Kg,28.13mg/ Kg,15.63mg/Kg.每日灌胃,连续90天后,观察各用药组大鼠脑电功率谱，学习记忆能力,血液常规，肝功能的变化，并比较分析其结果。
结果90天后，苯妥因钠,奥卡西平、拉莫三嗪、妥泰各组与造模组相比，脑电活动均改善，以拉莫三嗪组最明显；水迷宫测试中：奥卡西平、拉莫三嗪成绩较好；各用药组对造血、肝功能的影响与造模组及正常组相比无统计学意义。
结论对于慢性颞叶癫痫大鼠，奥卡西平与拉莫三嗪治疗效果优于妥泰和苯妥英钠。
关键词：动物模型，颞叶癫痫，抗癫痫药，疗效，副作用1. 引言我国目前有癫痫患者将近900万人。
通过药物治疗，约75％的病人可控癫痫制发作。
复杂部分性癫痫是人类最常见的一种类型，颞叶癫痫约占其中的70～80％。
苯妥因钠、奥卡西平、拉莫三嗪、妥泰是临床较常见的几种抗癫痫药,苯妥英钠是治疗颞叶癫痫(复杂部分性发作)的常用药物之一[1],奥卡西平是与卡马西平相似的抗癫痫新药,拉莫三嗪和妥泰是广谱抗癫痫新药.本研究采用海仁酸建立慢性颞叶癫痫模型,选取脑电功率谱,Morris水迷宫，血常规，肝功能测试评价几种抗癫痫药的疗效和副作用，并比较其结果。
2. 材料与方法2.1 材料健康雄性SD大鼠,体重250~300克(东南大学实验动物中心) 。
海仁酸(美国Sigma公司)，江湾Ⅰ型脑立体定向仪（第二军医大学生产）。
苯妥因钠片（天津力生制药股份有限公司），卡马西平片（上海三维制药有限公司），奥卡西平片（诺华公司），拉莫三嗪片（葛兰素史克公司），妥泰片（西安杨森制药有限公司）。
Morris水迷宫（上海吉量软件科技公司），Ac.T 5diff血液分析仪与Lx-20全自动生化仪（美国Beckman－Coulter公司），MD2000生物信号采集系统(江苏省捷达科技发展有限公司生产) 。
2.2 方法模型建立及分组按参考文献[2]制作：立体定向下海马CA3区注入4ug/kg海仁酸,于癫痫持续状态(SE) 60分钟后腹腔注射地西泮(4mg/kg)以中止SE,降低致死率。
选择完全点燃的大鼠随机分为六组（每组动物10只）:正常对照组、癫痫模型组、苯妥英钠组、奥卡西平组、拉莫三嗪组、妥泰组;药物灌胃自造模一周后开始,每天上午一次,剂量分别37.50mg/Kg,125mg/Kg, 28.13mg/Kg, 15.63mg/Kg（临床成人常用维持量：苯妥英钠6mg/Kg 、奥卡西平20mg/Kg、拉莫三嗪2.5mg/Kg、妥泰4.5mg/Kg；体重按60Kg，按单位成人体重剂量的6.25倍【3】计算转换为大鼠用量），共持续90天。
行为学观察大鼠点燃标准根据Racine[4]分级：0级无任何反应; Ⅰ级：咀嚼、眨眼、立须等面部肌肉的抽搐；Ⅱ级：以点头运动为主的颈部肌肉的抽搐；Ⅲ级：单侧前肢的阵挛、抽搐；Ⅳ级：双侧前肢阵挛、抽搐伴身体直立；Ⅴ级：双侧后肢强直、身体背曲强直、跌倒。
凡有连续至少3次Ⅳ或Ⅴ级发作的大鼠，被认为是完全点燃【5】。
图1：为正常对照组脑电图图2：为造模成功脑电图脑电记录：记录电极的埋植 在戊巴比妥钠(3 % ,45 mg/ kg) 腹腔麻醉下将大鼠固定于江湾Ⅰ型脑立体定位仪上,参照George Paxinos and Charles Watson图谱,在右侧海马（A=5.6mm、L=4.5mm、v=4.2mm）埋植不锈钢针记录电极(直径0. 3 mm ,尖端裸露0. 3 mm ,其他部位绝缘) , 参考电极（与记录电极性质相同的不锈钢电极）埋置与头皮下，接地电极插入下肢皮下，记录电极用牙托粉加502胶水固定。
+海马核团脑电活动采用MD2000生物信号采集系统记录。
参数置为，增益：4000；滤波：100Hz；时间常数：0.1S。
实验结束后用美蓝法验证电极植入的部位。
记录后对放电活动进行功率谱分析。
功率谱分析指标与预置为：频率范围0～100Hz，频率分辨率为0.195Hz。
使用快速傅立叶方法计算总功率中δ，θ，α，β1，β2五个频段的功率百分比，各频段的频率范围是：δ :1.17～3.91Hz，θ 3.91～8.20Hz，α: 8.20～13.28Hz，β1:13.28～20.31Hz，β2:20.31～30.8Hz。
Morris水迷宫实验术后90天进行5天的水迷宫实验。
实验时取上述各组大鼠，每天将大鼠面向池壁放人池中，记录2 min内寻找到平台的时间(即逃避潜伏期)，四个象限，取其平均值作为学习成绩。
大鼠在2 min内未找到平台，由实验者将其引至平台上并停留30s，再放回笼中，使观察周围标志物，以达到认知目的。
外周血象及肝功能检测大鼠断头取血EDTA抗凝，用Ac.T 5diff血液分析仪测定RBC/ (×109L-1)、Hb/(g·L-1)、PLT/(×109L-1)、WBC/(×109L-1)、L YM/（%)、GRAN/（%）等血常规指标；分离血清，Lx-20全自动生化仪测定AST/(U·L-1),ALT/(U·L-1),ALP/(U·L-1)、TP/ (g·L-1)、ALB/(g·L-1)等各项肝功能指标。
数据及统计分析数据结果用均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS12.0 forwin dows软件行单因素方差分析和q检验比较各组间差异，检验水准α＝0.05，P<0.05视为有显著性差异,P<0.01视为有非常显著性差异。
3. 结果3.1 脑电功率谱分析模型组大鼠与正常对照相比：δ、θ、α、β1、β2各频段功率发生非常显著的变化：α频段频率增加，慢波活动减少，快波β1、β2增多，抑制性波δ、θ明显减少(P<0.01),脑电背景活动明显异常，仍可见尖波、棘波、棘-慢波改变。
总功率显著增加(P<0.05)。
妥泰组主要作用于θ、α波，即θ功率增加(P<0.05)，α功率减低(P<0.01)，而对β、δ功率无明显影响(P>0.05)；苯妥英钠和奥卡西平组作用相似，α波频率减慢(P<0.05)，δ波、θ波活动增加总功率降低(P<0.05)；而拉莫三嗪组对δ、θ、α、β1、β2 均产生影响，抑制性波δ、θ增多(P<0.05)，α频段频率减慢(P<0.05)，慢波活动增多，使脑电背景活动变慢退步，快波β1 、β2减少(P<0.05)，（p其治疗后的总功率已接近正常对照组【6】。
3.2 学习记忆能力测试（Morris 水迷宫实验）结果见表2 与正常对照组比较，各组随着训练天数的增加，表明癫痫模型大鼠空间学习记忆能力明显降低，奥卡西平、拉莫三嗪组平均搜索时间在相应组次比造模组有明显的减少（P<0.05），而苯妥英钠、妥泰组与造模组相比，无显著性差异（P<0.05）。
各个用药组内随着训练次数增加平均搜索时间逐渐减少。
3.3 血液常规检查苯妥英钠组、奥卡西平组、拉莫三嗪组、妥泰组与正常对照组、模型对照组比较，各项血液常规指标无显著性差异（P<0.05）。
3.4 肝功能检查苯妥英钠组、奥卡西平组拉莫三嗪组、妥泰组与正常对照组、模型对照组比较，各项肝功能指标无显著性差异（P<0.05）表1 90天后各组大鼠EEG 各频段功率和总功率变化▲与正常对照组比较：P<0.01； * 与造模对照组比较：P<0.05。
表2 90天后各组大鼠空间学习记忆能力（水迷宫测试）搜寻时间比较（x ±s,n=10，s ）时间（天） 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 正常对照组 41.90±6.08 31.60±9.83 19.50±6.28 15.50±3.95 7.00±1.94造模对照组 80.70±12.19▲ 60.00±7.76▲ 49.20±7.39▲ 25.50±4.50▲ 18.00±2.91▲ 苯妥英钠组 81.60±12.35 62.90±9.01 48.80±8.31 24.80±5.47 17.10±5.43奥卡西平组 72.90±10.06* 49.90±10.12* 36.30±5.87* 20.70±4.08* 13.30±3.53*拉莫三嗪组 75.40±13.64* 55.80±8.31* 42.00±8.41* 21.20±4.47* 16.10±3.38 妥泰组 78.80±20.16 57.50±9.43 50.50±8.77 24.30±4.79 20.70±3.30▲ 与正常对照组比较：P<0.01; * 与造模对照组比较：P<0.05。
4. 讨论海仁酸颞叶癫痫模型是国际经典的慢性自发性颞叶癫痫模型，用来模拟人类的复杂部分性癫痫发作。
很多研究表明，大鼠海仁酸点燃已成为评价和筛选抗癫痫药的较好的模型。
传统抗癫痫药物中，苯妥英钠和卡马西平被认为是治疗人类复杂部分性癫痫发作的传统首选。
新药奥卡西平是卡马西平的一种10－酮基类衍生物，主要通过阻断神经细胞离子通道而发挥抗癫痫作用，拉莫三嗪和妥泰都是广谱抗癫痫药，其中拉莫三嗪能明显阻断电压依赖的钠通道，从而导致兴奋性神经递质，如谷氨酸和天冬氨酸的释放减少，而妥泰也已发现通过多种机制发挥抗癫痫作用。
组别 n δ θ α β1 β2 总功率正常组 8 27.82±1.43 24.64±1.46 8.46±0.66 8.47±0.81 11.48±1.06 30370.84±1309.16模型组 8 20.06±1.47▲ 20.63±1.61▲ 21.57±1.47▲ 12.29±1.79▲ 15.76±1.28▲ 39684.24±1438.89苯妥英钠 8 24.11±1.88* 23.74±1.11* 13.51±1.50* 11.72±1.62 14.84±1.69 34951.86±1680.01奥卡西平 8 24.52±0.90* 22.99±1.70* 13.61±1.04* 12.08±1.78 14.76±2.17 35361.70±1449.58拉莫三嗪 8 26.70±1.29* 23.78±1.31* 10.90±1.00* 10.47±1.05* 12.30±2.33* 31994.41±1730.46妥泰 8 21.21±0.76 23.42±1.31* 11.75±1.06* 11.84±2.06 14.56±1.45 35600.64±1227.87脑电的改变与癫痫联系十分密切，癫痫治疗的好转往往伴随着脑电的改善。