吉林化工学院科技性论文题目：土壤微生物的分离、培养、鉴定及菌落数的测定学号：12130117姓名：张金磊年级：2012级学院：化工与生物技术学院专业：生物工程指导教师：谢莹，许崇利（讲师）完成日期：2014年3月20 日摘要土壤是矿物质、有机质和活的有机体以及水分和空气等的混合体。
按重量计，矿物质占到固相部分（土壤干重）的90~95%或更多，有机质约占1~10%，可见土壤成分以矿物质为主。
土壤有机质就是土壤中以各种形态存在的有机化合物。
除此之外还有土壤溶液，它是土壤水分及其所含的溶解物质和悬浮物质的总称。
土壤溶液是植物和微生物从土壤中吸收营养物的媒介。
土壤微生物就是土壤中主要的有机生命体，土壤微生物是指生活在土壤中的细菌、真菌、放线菌、藻类的总称。
其个体微小，一般以微米或毫微米来计算，通常1克土壤中有106～109个，其种类和数量随成土环境及其土层深度的不同而变化。
它们在土壤中进行氧化、硝化、氨化、固氮、硫化等过程，促进土壤有机质的分解和养分的转化。
本次实验是研究土壤中细菌、真菌、放线菌的数目。
我们利用选择培养基，以便在土壤水溶液中选出目的菌种，在用分浓度梯度法在选择培养基上培养出但菌落，以便计数。
计数时可以根据不同菌种的不同形态学特征来分辨，如果出现与上述三种以外特性的菌种可以用革兰氏染色鉴别。
关键词：土壤微生物选择培养计数AbstractSoil is a mixture of minerals, organic matter and living organisms as well as water and air. By weight, for solid mineral (soil dry weight) of 90~95% or more, organic matter accounted for about 1~10%, visible in mineral soil composition. Organic compounds in soil organic matter is the soil in various forms. In addition to the soil solution, it is the floorboard of soil moisture and the contained dissolved substances and suspended substances. Soil solution is to absorb the nutrients in plants and microorganisms in soil medium. Organic life is the main soil microorganism, soil microbial refers to live in soil bacteria, fungi, actinomycetes, algae. The individual small, general with micron or nanometer to calculate, usually 1 grams of soil in 106 ~ 109, its species and quantity as soil environment and soil depth varies. They are oxidation, nitration, ammoniation, nitrogen fixation, curing process in the soil, promote the transformation of soil organic matter decomposition and nutrient.This experiment is to study the number of soil bacteria, fungi, actinomycetes. We use the selective culture medium, in order to choose to bacteria in the soil solution in the culture medium, but colonies on selection by density gradient method,in order to count. Counting according to the different morphological characteristics of different strains to distinguish, if appear with the three kinds of characteristics of bacteria can differential staining with gram.Keywords: soil microbial culture counting目录前言 (6)1 材料与方法 (7)1.1材料 (7)1.1.1菌株来源 (7)1.1.2培养基 (7)1.1.3相关试剂的配制 (7)1.1.4主要的实验药品与仪器 (8)1.2 实验方法 (8)1.2.1细菌分离 (8)1.2.2放线菌分离 (9)1.2.3霉菌分离 (9)2 结果与讨论 (9)3 结论 (10)致谢 (10)文献参考 (11)声明 (11)前言土壤中含有大量的微生物,不同深度,不同地点的微生物含量,种类也大不相同,本次实验使用的是来自于玉龙山的15厘米深度的腐殖土,土壤溶液较多,微生物的含量及健康状况良好,是优良的实验材料.本次实验要观察土壤中细菌、真菌、放线菌的数目,以实验要求我们使用牛肉膏蛋白胨培养基,高氏一号培养基,马丁氏培养基来选择培养相应菌种.考虑到本实验计数的目的,所以所有培养基均是固体培养基,且为了方便计数,从相关网站查到有关土壤平均含菌信息,制定出合理的浓度梯度,使之能在涂布培养后出现完全的单菌落.1 材料与方法1.1材料1.1.1 菌种来源土壤中细菌、真菌、放线菌,均由实验前各实验组同学取至玉龙山表层15厘米深的腐殖土.1.2.2 培养基牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏0.3g、蛋白胨1g、NaCl 0.5g、琼脂1.5g、水100ml、pH 7.2—7.4高氏一号培养基:可溶性淀粉 20g，KNO3 1g，K2HPO4 0.5g，MgSO4 0.5g，NaCl 0.5g，FeSO4 0.01g，琼脂 20g，水 1000ml,pH=7.2-7.4 马丁氏培养基：KH2PO4 1g，MgSO4 0．5g，蛋白胨 5g，葡萄糖 10g，琼脂 16g，水 1000ml，链霉素溶液（10000U/ml） 3.3ml（临用前加入）1.1.3相关试剂的配制牛肉膏蛋白胨培养基:分别称取蛋白胨和NaCl的所需量，置于烧杯中，加入所需水量的2/3左右的蒸馏水；用玻璃棒挑取牛肉膏至于另一小烧杯中，进行称量。
然后加入少量蒸馏水至于小烧杯中，加热融化，倒入上述烧杯中。
将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。
加所需的琼脂与三角瓶中，再将定容好的培养基倒入三角瓶中，待溶液冷却后，用1mol/L NaOH 溶液调pH=7.2-7.4。
然后分装，加塞，包装。
高压蒸汽灭菌20分钟。
高氏一号培养基:称取可溶性淀粉，置于烧杯中，加入少量的蒸馏水；加热使其溶化，再分别量取KNO3，K2HPO4，MgSO4，NaCl。
然后加入上述烧杯中。
将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。
加所需的琼脂与三角瓶中，再将定容好的培养基倒入三角瓶中，待溶液冷却后，用1mol/L NaOH 溶液调pH=7.2-7.4。
然后分装，加塞，包装。
高压蒸汽灭菌20分钟。
马丁氏培养基：分别称取培养基各组分所需，加入所需水量的2/3左右的蒸馏水于烧杯中；再将培养基营养物质加入其中，溶解。
将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。
加所需的琼脂与三角瓶中，再将定容好的培养基倒入三角瓶中，待溶液冷却后，用1mol/L NaOH 溶液调pH=7.2-7.4。
然后分装，加塞，包装。
高压蒸汽灭菌20分钟。
临用前加热培养基至60度，按3.3ml/L加入链霉素溶液，迅速混匀。
1.1.4主要的实验药品与仪器（1）实验药品:牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/L NaOH， 1mol/L HCl, 可溶性淀粉， KNO3 , K2HPO4, MgSO4 ，FeSO4，KH2PO4，葡萄糖（2）实验仪器:试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH 5.5—9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
1.2 实验方法1.2.1细菌分离：取土样1g，加入99ml无菌水中，震荡10min，制成10-2土壤稀释液，再取0.5ml 10-2土壤稀释液加入4.5ml 无菌水中，制成10-3土壤稀释液，以此类推······。
取10-5，10-6，10-7土壤稀释液0.1ml加入相应编号培养基中，涂平板，每个稀释度两个平板。
在30度恒温培养箱中培养24h后观察结果。
1.2.2放线菌分离：取土样1g，加入99ml无菌水中，震荡5min，制成10-2土壤稀释液，再取0.5ml 10-2土壤稀释液加入4.5ml无菌水中，制成10-3土壤稀释液，以此类推······。
取10-3，10-4，10-5土壤稀释液0.1ml加入相应编号培养基中，涂平板，每个稀释度两个平板。
在28度恒温培养箱中培养5~7d后观察结果。
1.2.3霉菌分离：取土样5g，加入95ml无菌水中，震荡5min，制成10-2土壤稀释液，再取0.5ml 10-2土壤稀释液加入4.5ml 无菌水中，制成10-3土壤稀释液，以此类推······。
将以灭菌的培养基融化，加入链霉素溶液，但培养基凝固后，取10-2，10-3，10-4土壤稀释液0.1ml加入相应编号培养基中，涂平板，每个稀释度两个平板。
在28度恒温培养箱中培养3~5d后观察结果。
2 结果与讨论当培养结束后，观察培养基上的菌落，由于本次试验的各种经济，效果，作用等等方面的原因，培养基并不能完全分离土壤中的各种菌类，例如，土壤中除了细菌，霉菌，放线菌外还有大量的杂菌，如：酵母菌、真菌、藻类等，微生物，如：各种寄生虫（卵）等，所以我们要根据细菌，放线菌，霉菌的宏观物理特性来分别。
当进行显微观察时，霉菌不用染色，放线菌、细菌要进行简单的染色，然后再显微镜下观察菌体形态。