二 菌种保藏的方法
3.沙土管保藏法
过筛、灭菌、干燥沙土 接种
制备菌种
真空干燥、密封
保存期：数年
适用：产孢子或形成芽孢的微生物
缺点：存活率低
二 菌种保藏的方法
4.麸皮保藏法（曲法保藏）
方法：灭菌、接种、干燥、低温保存
适用：产孢子的霉菌和部分放线菌 保存期：1年以上 优点：简单、经济
二 菌种保藏的方法
二 菌种保藏的方法
1.斜面保藏法
条件：4℃冰箱，相对湿度50% ～ 70% 保存期：1 ～ 6个月 适用：细菌、放线菌或酵母菌 影响因素：培养基和培养条件 优点：简便、成本低，随时观察菌株性状、 缺点：自发突变、染菌、菌种退化
2.液体石蜡保藏法
适用范围：广泛 保存期：1 ～ 2个月 方法：灭菌、倾注、封口、直立放置 缺点：占据空间、菌种生产能力下降
二 菌种保藏的方法
7.甘油保藏法
悬浮于灭菌的10%-15%甘油介质 保存期：-20 ℃冰箱，保存0.5～1年
超低温冰箱（-70℃）保存10年
优点：简便
缺点：需要设备超低温冰箱
三、菌种保藏的注意事项
菌种保藏前的培养 无菌操作
制备过程 菌种的存放与使用
第三节
中心名称
中国典型培养物保藏中心 普通微生物菌种保藏中心
第六章 菌种保藏
主要内容
菌 种 保 藏
目的和管理规程
原理、方法、要点
菌种保藏机构
菌种衰退？
• 生产菌株性状的劣化或遗传标记的丢失：
1.菌落形态的改变
2.生长速度缓慢
3.生产能力下降 4.抗不良环境能力减弱（抗噬菌体、低温等）
什么原因引起菌种退化？
• 1.基因突变
• 2.连续传代
• 3.不良培养条件及不良保藏条件
菌种保藏机构
所在地
武汉大学 中国科学院微生物研究所 中国科学院病毒研究所 中国农业科学院 土壤肥料研究所 轻工部食品发酵工业研究所 中国医学科学院 皮肤病研究所 中国药品生物制品检定所 中国医学科学院 医药生物技术研究所 国家医药管理局 四川抗生素工业研究所 华北制药厂抗生素研究所 农业部兽医药品监察所 中国林业研究所
缩写
CCTCC CCGMC
邮码
武汉430072 北京100080 武汉430071 北京100081 北京100027
保藏范围
专利菌种 真菌，细菌 病毒 农业微生物
农业微生物菌种保藏中心
ACCC
工业微生物保藏中心
CICC
工业微生物
医学微生物菌种保藏管理中 心
CMCC
南京210042 北京100050 北京100050 成都610051 石家庄050015 北京100081 北京100091
定。
• 目的：保持菌种的存活率、优良性பைடு நூலகம்、生
产能力
2.菌种保藏的管理规程 ·符合国家相关法律法规 ·复核、鉴定、纯度检验、资源信息整理 ·菌种信息
• 菌种保藏方法、出入库、异地保藏备份、
高致病性病原微生物和专利菌种、菌种保
藏设施
• 定期检查纯度、生物学活性
• 3.菌种的生物安全性分类 • 一类微生物（对个体和群体危害程度高） • 二类微生物（对个体危害程度高，对群体危害较高）
5.冷冻干燥保藏法 保护剂
处理安瓿管 制备菌悬液 真空封口 预冻 安瓿管的保藏
冷冻干燥
保存期：4℃冰箱，保存5-10年 适用：广泛 优点：繁琐、设备技术要求高
6.液氮超低温保藏法
细胞 保护剂
二 菌种保藏的方法
分装入安瓿管
封口
预冻
置液氮内
保存期：-150 ℃ ～ -196℃，保存15年 适用：最为广泛 优点：高效 缺点：购置设备、费用高
• 三类微生物（对个体危害程度中度，对群体危害较低）
• 四类微生物（对个体和群体危害程度低）
• 3.菌种的防护级别 • 一级生物防护
• 二级生物防护
• 三级生物防护 • 四级生物防护
第二节 菌种保藏的原理、方法及要点
一、菌种保藏的原理
1. 2. 3. 4.
低营养 干燥 隔氧 低温
降低代谢速率 使细胞处于休眠状态
菌种退化的防止
• 1.减少传代次数
• 2.用单核细胞和单菌落移种传代
• 3.菌种纯化
• 4.采用良好培养基和培养条件 • 5.科学保藏
第一节 菌种保藏的目的和管理规程
1.菌种保藏（cuclture collection）
• 将微生物菌种用各种适宜的方法妥善保存，
避免死亡、污染，保持其原有性状基本稳
真菌 细菌 抗生素产生菌
抗生素菌种保藏管理中心
CACC
新抗生素产生菌 抗生素工业生产菌种 兽医微生物 林业微生物
兽医微生物菌种保藏中心 林业微生物菌种保藏中心
CVCC CFCC
小结
目的和管理规程
菌 种 保 藏
原理、方法、要点
菌种保藏机构