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病理组织学检测

病理组织学检测
收集检测病料,各种典型病变的组织器官,用10%福尔马林溶液固定,常规石蜡切片,HE染色,光镜观察。

具体操作步骤如下:
(1)取材:选择刚死的新鲜的组织;采取样品的时候要注意,将动物剖检之后,要尽快的的采取相关组织的材料;采样的刀片一定要锋利,切取组织块时避免前后过度的拉动或用力挤压,以防止造成组织结构变形或人为损伤。

(2)固定:将采集好组织样品固定于10%的中性福尔马林溶液中,过夜固定或者至少固定24h。

(市场技术人员只需采集病料,并用10%的中性福尔马林固定后,室温存放,直接送检。

注:用封闭好的瓶子存放样品,防止福尔马林外流。


(3)组织修块及水冲:将福尔马林溶液固定好的组织进行修整,选好病变部位组织的切面,尽量修的薄一些,将修整好的组织块放在流动的自来水下冲洗10-16h,以便去掉组织中的甲醛。

(4)脱水:将修好的组织块依次放入70%、80%、85%、90%、95%以及100%(一和二)梯度酒精中进行脱水处理。

脱水的具体程序及时间为:70%酒精2h→80%酒精2h→85%酒精2h→90%酒精1h→95%酒精30min→无水乙醇(100%)I 45min→无水乙醇(100%)II 45min。

(5)透明及浸蜡:组织块完全脱水后,将其分别浸入二甲苯中进行透明,具体透明时间因组织块厚薄而异。

将透明好的组织块,放在55℃左右的恒温箱中,进行浸蜡2-4h。

(6)包埋:将70℃融过的石蜡倒入铁制的包埋框内,整齐的摆放组织块,一段时间后再进行修切。

(7)切片:先将切片机调至3mm厚度,开始切片。

(8)展片及粘片:将切好的组织片取下放到40℃的温水中,利用酒精将之展开。

(9)烤片:将捞出的组织切片放于37℃培养箱中烤片2h或者过夜。

(10)HE染色:按照下面的时间及顺序进行。

首先二甲苯Ⅰ15min→二甲苯Ⅱ10-15min→酒精/二甲苯3-5min→无水乙醇3-5min→95%酒精3-5min→85%
酒精3-5min→75%酒精3-5min→蒸馏水4-6min→苏木素染色液3-5min→自来水冲洗约1min→1%盐酸酒精4~5s→流动的自来水冲洗10-15min→90%酒精2-4s →1%伊红染色液3-6s→95%酒精Ⅰ3s→95%酒精Ⅱ1-2min→无水乙醇Ⅰ2-4min→无水乙醇Ⅱ5min→二甲苯Ⅰ20-30min。

(11)封片:将经过二甲苯清洗的盖玻片盖于滴加了中性树脂的组织切片上,37℃温箱中烤干,在光学显微镜下观察。

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