石蜡切片免疫荧光操作规程
试剂
1)二甲苯
2)PBS缓冲液
3)0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。

4)goat血清
5)一抗稀释液： 3%BSA in TBS，pH7.4
操作流程
1.脱蜡和水化
脱蜡前，应将组织切片在室温中放置60min或60℃恒温箱中烘烤20min。

1）组织芯片置于二甲苯中浸泡10min，更换二甲苯后再浸泡10min；
2）无水乙醇中浸泡5min；
3）95%乙醇中浸泡5min；
4）70%乙醇中浸泡5min；
2.PBS洗两次各5min。

3.抗原修复，用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片。

煮沸热修复电炉或者水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至95℃左右，放入组织芯片加热10~15min，必须等缓冲液冷却后，方能将切片取出。

4.PBS洗5min。

5.滴加5%正常山羊血清，室温封闭30min，甩去多余液体。

℃小时（4℃过夜后在37℃复温45min）。

6.滴加一抗，室温1小时或者4℃过夜或者371
7.PBS洗3次每次5min。

8.滴加荧光标记的二抗，室温避光孵育1h。

（注意抗体针对的种属，使用浓度：Alexa488、Alexa555为1：1000，Cy3、FITC为1：200，用锡箔纸包住培养板放在抽屉中避光。

）
9.PBS洗3次每次5min。

10. Hoechst染色：把1000×Hoechst用PBS稀释，50ul/片，染色10min。

11. PBS洗3次每次2 min。

12.封片： Mounting Medium封片，等Mounting Medium凝固后再拍照。