3' RNA 5' cDNA
图8-3 NASBA原理示意图 16
三、感染性疾病分子诊断的标本处理
▪ 标本采集处理主要包括选择合适的标本种 类、标本量、抗凝剂等及对标本进行合适 的传送、保存和预处理。
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四、感染性疾病分子诊断的结果解释
1. 阴性结果 假阴性可能性 方法的灵敏度太低 方法失败 目标分子
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分支链DNA信号放大技术(bDNA)
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nucleic acid sequence-based amplification (NASBA)
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Figure 1. Target generation scheme for SDA. This figure depicts the initial steps in an SDA reaction which transform the original target sequence into the amplification cycle depicted in Figure 2.
• 不完全双连环状DNA
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1. 一般性检出策略和方法
针对特异性的核酸序列进行核酸分子探 针杂交，或者利用常规PCR技术直接检 出微生物的DNA/RNA，它能够判断有 无感染和是何种病原体感染。
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2. 完整检出策略和方法
按照诊断→分型→亚型→耐药性检 测的思路，利用多种分子诊断手段对感 染性病原体进行分析。
基因芯片、基因测序等
3
4
第十四章 感染性疾病的分子诊断
生物化学与分子生物学学科 2011.4
5
第一节 概 述
感染性疾病：由某种病原体所致，通过不 同方式引起人体发生感染并出现临床症 状的疾病。
病原体：病毒、细菌、原虫、支原体、 衣原体、立克次体。
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常规检测方法： ▪ 免疫学方法 ▪ 微生物学方法
受敏感性、特异性限制，不易早期诊断， 并且不易提供病原体分型及耐药性方面的信 息。
cDNA 3’端 序列互补
5'
5' 引物A 3'
5' 3'
5'
5' 3'
T7RNA聚合酶 3'
5' 靶RNA
Байду номын сангаасRT RNAseH
3' cDNA 5' RNA
3' cDNA
RT
引物B
3' cDNA模板
5'
引物A 5'
3'
5'
100-1000 RNA扩增子
3'
5'
3'RNA
5' 3'
引物B
RNAseH
5' cDNA
Figure 2. The SDA reaction cycle. These reaction steps continuously cycle
during the course of amplificatio1n5.
引物A 5’端 带有T7RNA 聚合酶结合位
点，3’端碱 基与靶RNA 3’端序列互 补;引物B的碱 基序列与
2. 阳性结果 假阳性可能性 方法的特异性 受到污染
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3. 定性检测结果 有时不能提供病原体活力相 关信息 临床治疗病情缓解后一定时间内，在患者 样本中仍可以检测出相应的病原体。 有些病原体潜伏在进体内，没有临床症状。
4. 疾病状况的判断 检测出病原体的存在并不 能说此病原体就是引起疾病的直接原因。 该病原体可能是一种正常菌群
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五、感染性疾病分子诊断的临床应用 及评价
▪ 用于感染性疾病治疗的监控和预测、病情 发展过程的危险性评价及疾病预后等。
▪ 耐用性的检测 ▪ 细菌的分型 ▪ 流行病调查
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第二节 病毒的基因检测
人类许多感染疾病由病毒引起，如病毒性肝 炎、脑炎、流行性感冒等等，占人类传染疾 病的75%左右。400多种不同病毒。
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分子生物学方法：
▪
聚合酶链式反应（PCR）
▪
核酸杂交
▪
基因芯片
早期、特异地进行诊断，能提供病原体
分型及耐药性方面的信息，同时进行大量基 因的检测。
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一、感染性疾病的分子诊断，其诊断 策略可以分为以下两种：
一般性检出策略，即只需要提供是否有 某种病原体的感染；
完整检出策略，即不仅对病原体做出诊 断，还要进行分型（包括亚型）和耐 药性方面的检测。
第三篇 应用篇
▪ 分子诊断以DNA、RNA和蛋白质为材料， 通过应用分子生物学技术，检查基因的存 在、结构缺陷或表达异常，从而对人体状 态和疾病作出诊断。
▪ 着重介绍感染性疾病、遗传性疾病、复杂 疾病等的分子诊断基本策略和方法。
1
分子诊断的临床意义在于不仅能够对疾 病作出早期诊断、确切诊断，而且还能确 定个体归于疾病的易感性以及疾病的分期 分型、疗效监测、预后判断等。随着分子 诊断学的发展，分子诊断的原理和方法不 仅适用于遗传性疾病，而且也广泛应用于 感染性疾病、肿瘤等医学领域。
DNA 聚合酶 HBcAg
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Dane颗粒（完整的病毒）形态
HBsAg
（外膜蛋白）
HBcAg
（核衣壳蛋白）
HBV DNA
DNAPol
完整的乙肝病毒颗粒直径42纳米 由双层外壳和一个核心组成的，核心直径为27纳米， 内含DNA双链和DNA多聚酶 23
（一）病毒基因组结构
• 3.2kb双链DNA病毒
病毒结构：大 小：20-300nm 核心区：核酸（DNA或RNA） 外周衣壳：蛋白质 包膜：脂质（镶嵌有蛋白质）
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一、 乙型肝炎病毒
我国是HBV高流行区，50%－70%的人 受过感染，8%－10%是HBV携带者，肝 炎患者中60%是慢性肝炎患者，导致肝硬 变，HBV又与原发性肝癌密切相关。 外壳（HBsAg): 外壳蛋白成分为表面抗原 核心（HBcAg)： DNA
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二、感染性疾病分子诊断的常用方法
根据目的基因是否被放大， 可分为杂交法和扩增 法。 ▪ 信号放大技术检测方法 靶分子数目不变，而检测的探针信号放大 采用多酶、多探针或二者结合等方法来增加探针 标志物的浓度使检测信号得到放大。 ▪ 靶分子扩增技术检测方法 靶分子（RNA、DNA或探针）的扩增 ▪ PCR、替代扩增、LCR等
从生物中心法则来看，分子诊断包括检 测基因的结构异常和基因表达异常。常见 的分子诊断方法如下：
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基因结构异常
基因表达异常
中心法则 DNA
转录
mRNA
反转录
翻 译 蛋白质
检测方法
PCR
DNA测序 Southern-blot
基因芯片
RT-PCR FQ-PCR Nothern-blot 基因芯片
ELISA Western-blot 组织化学染色 蛋白质芯片