三、实验材料、仪器和试剂：
1、实验材料：苹果（约0.5 g） 2、仪器：水浴锅；可见分光光度计等。 3、试剂：
（1）0.5 mg/mL葡萄糖标准液 （2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂(碱性)
四、实验步骤：
1、葡萄糖标准曲线的绘制 2、还原糖的提取 3、样品含糖量的测定:
1、葡萄糖标准曲线的绘制:
祝您成功！
酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿 色，其颜色的深浅与糖含量成正比关系， 在620nm波长下可测定其光密度值。
• (2)砷钼酸比色法
• 还原糖在碱性条件下加热，可以定量地 还原二价铜离子为一价铜离子，即产生砖 红色地氧化亚铜沉淀，其本身被氧化。氧 化亚铜在酸性条件下，可将钼酸铵还原， 还原型地钼酸铵再与砷酸氢二钠起作用， 生成一种蓝色复合物即砷钼蓝，其颜色深 浅在一定范围内与还原糖地含量（即被还 原的Cu2O）成正比，用标准葡萄糖与砷钼 酸作用，比色后做标准，就可测得样品还 原糖含量。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、 双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和 多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进 行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量 （还原糖以葡萄糖含量计）。
2、还原糖与3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂反应：
在碱性条件下，还原糖与DNS试剂反应，还原糖被 氧化成糖酸及其它产物， DNS被还原为棕红色的3-氨 基-5-硝基水杨酸。
(3)费林试剂滴定法
费林试剂由甲乙两种溶液混合而成， 甲液（硫酸铜）与乙液（氢氧化钠）生成 天蓝色沉淀，在碱性溶液中，乙液（酒石 酸钾钠）使氢氧化铜溶解生成一种络合物， 还原糖在碱性加热条件下，可以定量还原 费林试剂中Cu2+为Cu1+ ,使费林试剂脱色， 其脱色的程度与还原糖含量成正比关系。
知识回顾 Knowledge Review
待测。
3、样品含糖量的测定: 取提取液0.5ml，按上表操作。
五、计算：
还原糖含量(μg/ g )=
还原糖含量χ1(μg) ×样液总体积 测定用样品液体积×样品鲜重(g)
六、思考题：
1、何谓还原糖？测定还原糖的方法还 有哪几种? 2、本实验的注意事项?
测定还原糖其它方法
(1)蒽酮比色法： 强酸可使糖类脱水生成糠醛，糠醛与蒽
取7支试管，按下表操作，以标准葡萄糖含量为横坐标， 对应的吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
管 号
葡萄糖 标准液
mL
蒸馏水 mL
DNS mL
沸水 蒸馏水 光密度值 浴 mL O比溶液)
0
0.5
0
1
0.1
0.4
50
2
0.2
0.3
100
3 4
0.3 0.4
0.2 0.1
3,5-二硝基水杨酸 (DNS)
3-氨基-5-硝基水杨酸 (棕红色,A540)
3、在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质(3氨基-5-硝基水杨酸)颜色的深浅成正比关系，利用 分光光度计，在540nm波长下测定光密度值， 查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖 的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分 子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
生物化学实验
实验 四
植物组织中还原糖的测定
—3,5-二硝基水杨酸比色法
学时：3
一、实验目的：
1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理。 2、掌握比色法测定还原糖的操作方法。
二、实验原理:
1、还原糖：指含有游离的半缩醛(酮)基糖。 单糖都是还原糖；某些二糖是还原糖（如麦芽糖、
乳糖等）；多糖为非还原糖。 2、总糖的提取及双、多糖的酸水解。
0.5
5min 冷却
4 混匀
150 200
5
0.5
0
250
还原糖提取液
0.5
χ1
2、还原糖的提取
① 取0.5g样品于研钵中，加水2ml，充分研磨。 ② 用2ml蒸馏水分三次冲洗研钵(总体积小于10
ml)，转入10ml离心管中。 ③ 在50℃水浴中恒温20分钟，冷却后于
4000r/min, 离心5分钟。 ① 取上清转入50ml容量瓶中，用蒸馏水定容，