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植物染色体倍性分析

➢用途广泛---任何植物样品均 可被检测:叶、秧苗、根茎、花、 果实、种子等。
➢任何动物、海洋及淡水生物均 可被检测。
➢高精确性---绝大多数动植物 倍体检测精度可以达到±1染色 体。
Partec倍性分析仪在植物领域的突出优势
• 可以实现2分钟内完成所有植物(花、叶、茎、根、果实、 种子、花粉)样本的染色制备及上机检测;
固定24 h,取出的根用蒸馏水冲
洗两遍后转入1 mol/L盐酸溶液,
60℃水浴中解离6~7 min,然后
在蒸馏水中浸泡10 min以上。用
卡宝品红染色压片,奥林巴斯显
微镜(BH—2)400倍下观察根尖细
胞染色体并计数,每个再生株观
察5条根。荧光显微数码摄细胞分析,又称流式
的情况发生。 3. 不同样本的染色时间不同,应根据样本特性决定染色时间。
大多数植物样本在裂解和染色的时间只需要一分钟种。对 于某些特殊的样本,需在研究中摸索最佳的染色时间,适 当延长。
• 最少的样品处理步骤; • 可以实现最为精准的DNA含量检测; • 最简单的仪器操作程序; • 最省时省力且省钱的后期维护保养; • 可以为您的论文添加世界上最为完美的DNA峰直方图; • 可以在您的研究领域开创与DNA含量相关的新篇章。
样本的处理(以植物叶片为例)
所需试剂:Partec DNA二步法试剂 其它工具:刀片、培养皿、30um滤网,样品管、加样枪等
纵坐标,Y轴 表示数量累计,相同强度的光 信号在同一横坐标点(通道) 内向Y轴方向累计。
DNA-DAPI
倍体分析仪测试流程
倍体分析方法比较
染色体计数法
Partec倍体分析仪
• 实验操作复杂
• 取样容易,不受取材的时间
• 耗时长、检测通量低(不适 季节限制
合大量材料的倍性鉴定) • 可以检测大量样本,节约时
实验步骤
1. 取待测新鲜植物叶片0.5平方厘米,置于培养皿中。 2. 取400ul裂解液加于植物叶片周围,裂解1分钟。 3. 裂解完成后,用刀片将叶片切碎。 4. 向切碎的植物叶片中加入染液1600ul,染色1分钟。 5. 将培养皿中的液体用30um滤网过滤至样品管中 6. 上样。
注意事项
1. 所取植物叶片需新鲜,易于切碎,不易过大或过小。 2. 在切叶片的过程中,尽量切碎植物叶片,避免割植物叶片
伤组织原生质体电融合后再生的体细胞杂种进行分析, 结果表明,所有的体细
胞杂种植株荧光强度是二倍体对照的两倍,这说明两者
倍体分析的传统方法—染色体计数与分析
• 实验方法与步骤
实验结果
• 取每个再生株根部刚发出的小于
1 cm的根5~6条立刻放入饱和对
氯二苯溶液中,常温下放置4 h
后,转入卡诺(Camoy s)固定液
细胞术(FCM),是以高
能量激光照射高速流动状
态下被荧光色素染色的单
细胞或微粒,测量其产生
的散射光和发射荧光的强
度,从而对细胞(或微粒)
的物理、生理、生化、免
疫、遗传、分子生物学性
特点:
状及功能状态等进行定性 或定量检测的一种现代细
(1)单细胞分析。(2)快速分析。(胞3)分多析参技数术相。关测量。
体育种是利用人工诱变或自然变异等,通过细胞染色体 组加倍获得多倍体育种
植物学研究中Partec倍体分析仪的应用
在植物细胞研究中还可以分选出活的原生质体,并通过 分选出来的原生质体再
生出植株,其中最有意义的就是选出由原生质体融合所 产生的异核体。对酸橙
(Citrus aurantium L.)叶肉原生质体和甜橙(C sineniscv.Shamouti)胚性愈
Partec染色体倍性分析仪在植物研究中的应用
植物学研究中Partec倍体分析仪的应用
植物的核DNA含量和倍性水平是植物学研究中的基础研 究指标。
对植物种质资源鉴定 、种群进化、物种分类、生态学 研究、多倍体育种、单倍
体育种、多倍体诱导等多方面都具有重要意义。
植物学研究中Partec倍体分析仪的应用
生物体的单倍体基因组所含DNA总量称为C值。C值是种 群进化、物种分类和生态
学研究的有利分析工具和证据。
由于近缘物种的C值极为相似,因而可以通过C值获取基 因组大小这一特征信
息,用于构建物种的系统进化树,分析亲缘关系,同时 可以通过测定C值来鉴定
杂交物种。
借助C值与气孔保卫细胞长度、面积正相关的规律,通 过测量植物化石的气孔长
植物学研究中Partec倍体分析仪的应用
植物染色体组多倍化是促进物种形成的重要因素之一, 大部分开花植物的祖先
都经历过一轮或者几轮多倍化。植物类群染色体倍性对 研究植物系统进化,澄
清植物的物种起源模式有科学研究价值。
鉴定染色体倍性是植物单倍体育种的必要环节,例如在 花药单倍体育种实验
中,再生组织可能是纯单倍体,也可能是混倍体。还可 用于多倍体育种,多倍
间,每天可测超过200个样本,
通过改进流程每天可测试
1000个样本
• 仪器自动识别倍体峰值
CyFlow® PA
检测时间小于2分钟;
➢采用Partec专利染色技术,无 细胞壁标本处理及染色时间小于 2分钟,有细胞壁标本处理及染 色时间小于15分钟。
➢操作便捷---无需制备和染色 中期染色体。
➢适用于DAPI和PI(需配备 532nm绿色激光器)染色的生物 DNA倍体检测;
荧光信号的线性测量
线性放大: 即放大器的输出与输入是线性关系
,细胞DNA含量、RNA含量、总蛋白质含量等 的测量一般选用线性放大测量。在倍体分析 实验中,待测样本的倍性(荧光强度)为标 样的整数倍,在测量时一定选择线性放大。
倍体分析仪数据的显示---直方图
横坐标,X轴 表示光强度,强度高的光信号 靠右侧显示。
(4)定性或定量分析细胞。(5)统计学意义明显。 (6)分
选。
嵌入性染料
荧光染料DAPI,直接与细胞内的DNA双螺旋结构中的AT碱基对结合,从而使细胞在激发光的照射下发特定波 长的光,通过判断发射光的强弱来推算A-T碱基对的多 少,从而得知DNA的倍性关系。
信号检测与分析
当细胞携带荧光素标记物,通过激光照射区时,受激 光激发,产生代表细胞内不同物质、不同波长的荧光 信号,这些信号以细胞为中心,向空间360度立体角发 射,产生散射光和荧光信号, 下图是以激发光光源波 长488nm为例的示意图:
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