(2)灭菌的方法： 灭菌的方法： 灭菌的方法
1、灼烧灭菌 接种环、接种针、 接种环、接种针、 试管口 干热灭菌： 2、干热灭菌： 160℃下加 160-170 ℃下加 2h。 热1-2h。 高压蒸气灭菌： 3、高压蒸气灭菌： 100kPa、 100kPa、121 ℃ 下维持15 15下维持15-30min.
专题2Байду номын сангаас:微生物的培养与应用 专题2 :微生物的培养与应用
微生物基础知识
病毒 细菌
病毒界 原核生物界 真菌界 原生生物界
微生物包括哪五类： 微生物包括哪五类： 放线菌 真菌 原生动物
特点：结构都相当简单,个体多数十分微小. 特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通 常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到， 常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有 的甚至没有细胞结构. 的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿 不能进行光合作用. 素.不能进行光合作用.
标准
培养基类型 固体培养基
配制特点 加入琼脂较多 加入琼脂较少 不加入琼脂 由已知成分配制而成， 由已知成分配制而成， 分配制而成 培养基成分明确 培养基成分明确 由天然成分配制而成， 由天然成分配制而成， 培养基成分不明确 培养基成分不明确 添加某种指示剂或化学 添加某种指示剂或化学 药剂 添加（或缺少）某种化 添加（或缺少）某种化 学成分 学成分
液体培养基： 液体培养基：
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
半固体培养基： 半固体培养基：
无动力
有动力(弥散) 有动力(弥散)
(是否运动) 是否运动)
选择培养基
加入青霉素的培养基: 加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 分离酵母菌、 加入高浓度食盐的培养基: 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物
无菌技术包括： 无菌技术包括： （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 清洁 ）对实验操作空间、 和消毒 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 灭 ）将培养器皿、 菌； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯 ）为避免周围微生物污染， 旁进行； 火焰附近 旁进行； 相接触。 （4）避免已灭菌处理的材料用具与 周围物品 相接触。 ）
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物 被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 答：无菌技术还能有效避免操作者自 身被微生物感染。 身被微生物感染。
2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭 如果需要，请选择合适的方法。 菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 玻棒、试管、 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 ）、（2）需要灭菌；（ ；（3） 答：（1）、（ ）需要灭菌；（ ）需要消毒。 ：（ ）、（
8．灭菌: 灭菌: 50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中 ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中， 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中， 塞上棉花塞，包上牛皮纸， 塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌 在压力为100kPa、温度为121℃ 100kPa 121℃， 锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌 15～30min min。 培养皿用旧报纸包裹 用旧报纸包裹， 15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干 热灭菌箱内， 160～ ℃下灭菌 下灭菌2 热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。 倒平板: 9．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时 左右时， 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附 近倒平板。（倒平板操作见课本） 。（倒平板操作见课本 近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平 无杂菌污染才可用来接种. 板，无杂菌污染才可用来接种.
主要应用 菌种分离 鉴定 菌种分离,鉴定 分离 鉴定, 计数 菌种保存 工业生产，连续 工业生产， 生产 培养
物理性质
半固体培养基 液体培养基
合成培养基 化学组成 天然培养基
菌种分类、 菌种分类、鉴定 工业生， 工业生，产降低 成本 菌种的鉴别
鉴别培养基 目的用途 选择培养基
菌种的分离
固体培养基： 固体培养基：菌落
一、基础知识： 基础知识：
（一）培养基 培养基（培养液） 培养基（培养液）是由人工方法配制而成 专供微生物生长繁殖使用的混合营养液 的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。 1.培养基的类型和用途 1.培养基的类型和用途 按物理状态来分：培养基可分为固体培 （1）按物理状态来分：培养基可分为固体培 养基、液体培养基和半固体培养基。 养基、液体培养基和半固体培养基。其中固 体培养基用于菌种分离、鉴定等。 体培养基用于菌种分离、鉴定等。 （2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别 按功能来分，可分为选择培养基和 选择培养基 培养基。 培养基。 按成分来分，可分为天然培养基 天然培养基和 （3）按成分来分，可分为天然培养基和合成 培养基。 培养基。
最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌， 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以 高压蒸汽灭菌 杀灭所有的生物， 杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休 眠体， 眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被 破坏。 破坏。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌 高温干热灭菌。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了 防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染， 防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻 璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口， 璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花 也可采用各种金属、塑料及硅胶帽， 塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只 可让空气通过， 可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过 。 培养微生物的培养皿是由正反两平面板互扣 培养微生物的培养皿是由正反两平面板互扣 而成， 而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染 而设计的。 而设计的。
培养基的种类
在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要 的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。 液体培养基 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种 例如，在培养基中加入青霉素，以抑制细菌、 指示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同种 据物理性质分 半固体培养基 放线菌的生长，从而分离到酵母菌和霉菌。又 类的微生物。例如，在培养基中加入伊红和美 如，在培养基中加入高浓度的食盐可以抑制多 固体培养基 常用于工业生产 蓝，可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在 种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生 大肠杆菌等细菌：如果有大肠杆菌，其代谢产 长。 常用于观察微生物的 天然培养基 物就与伊红和美蓝结合，使菌落呈深紫色，并 运动、鉴定菌种 据化学成分分 带有金属光泽。 用于微生物的分离、计数 合成培养基 常用于工业生产 选择培养基 据用途分 鉴别培养基常用于分类、鉴定
3.微生物实验室培养的基本操作程序 3.微生物实验室培养的基本操作程序 1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存
三、实验操作 （ 一.）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌） ）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）
操作步骤 1．计算、称量 计算、 2．溶化 pH： pH7． 3．调pH： pH7．6 过滤：这一步可以省去。 4．过滤：这一步可以省去。 分装： 5．分装：分装过程中注意不要使培养 基沾在管口或瓶口上， 基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而 引起污染。 引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过 三角烧瓶容积的一半为宜。 三角烧瓶容积的一半为宜。 6．加塞 7．包扎
（2）灭菌的定义： 灭菌的定义： （１）消毒定义： 消毒定义：
使用强烈的理化因素杀死物体内外 使用强烈的理化因素杀死物体内外 强烈 所有的微生物 包括芽孢和孢子， 微生物， 所有的微生物，包括芽孢和孢子，而达 完全无菌之过程 之过程。 到完全无菌之过程。 灭菌消毒技术是微生物有关工作中最 普通也是最重要的技术。 普通也是最重要的技术。
鉴定培养基： 鉴定培养基：鉴定所培养生物的类型 大肠杆菌在伊红美蓝 大肠杆菌在伊红美蓝培养基上典型特征 伊红美蓝培养基上典型特征
大肠杆菌呈 黑色中心 ,有金属光泽
2、培养基配制原则：
• （1）目的要明确：根据微生物的种类、培养 ）目的要明确：根据微生物的种类、 目的等确定配制培养基的种类， 目的等确定配制培养基的种类，因为不同的微 生物对培养物质的需求不同。 生物对培养物质的需求不同。 • （2）营养要协调：注意各种营养物质的浓度 ）营养要协调： 和比例。 和比例。 • （3）pH要适宜：各种微生物适宜生长的 范 要适宜： ） 要适宜 各种微生物适宜生长的pH范 围不同。 围不同。 • 细菌pH为：6.5-7.5； 细菌 为 ； • 放线菌pH为 放线菌 为：7.5-8.5； ； • 真菌pH为 真菌 为：5.0-6.0。 。
2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 指使用较为温和的物理或化学方法 指使用较为温和的物理或化学方法 温和 仅杀死物体表面或内部一部分 一部分对人体有 仅杀死物体表面或内部一部分对人体有 害的微生物。（不包括芽孢和孢子） 。（不包括芽孢和孢子 害的微生物。（不包括芽孢和孢子）
消毒与灭菌的比较 比较 理化因素的 作用强度 项 消灭微生物的 芽孢和孢子能 否被消灭 数量
消毒
较为温和
部分生活状态 的微生物
不能
灭菌
强烈
全部微生物
能
3.常用的消毒与灭菌的方法 3.常用的消毒与灭菌的方法 (1)消毒的方法： 消毒的方法： 消毒的方法
100℃煮沸 1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 煮沸消毒法 100℃煮沸5 巴氏消毒法：70℃下煮 下煮30min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min 下煮15min 或 80 ℃ 下煮15min 化学药剂消毒法: 75%酒精 酒精、 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁 尔灭等进行皮肤消毒; 尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 ……