不明原因反复自然流产与PAI—I基因4G/5G多态性的关系
潍坊市人民医院产二科付锦华
自然流产是妊娠期常见的并发症之一，其发病率为10%—18%，原因不明的反复自然流产患者占其中的40—60%，近年来，提出遗传性易栓症与流产的概念，纤溶酶原激活剂抑制物—I（PAI—I）水平升高与血栓性疾病密切相关，且两者间存在基因多态性依赖关系[1，2] ，PAI—I基因启动因子区4G/5G多态性与早产、流产、死胎等妊娠并发症有关[3]，我们对PAI—I基因4G/5G多态性与反复自然流产的关系进行了研究，现报道如下：
一、对象与方法
1、对象：（1、）反复自然流产组：自2004年1月—2005年12 月来我院产科就诊，并经临床诊断的反复流产患者72例，平均年龄为29±4岁，所有患者既往有自然流产史（1—6次不等），本次妊娠出现先兆流产或B超诊断为宫内死胎，孕期均在3个月内，排除内分泌失调、感染、血型不合、生殖道异常等因素，夫妇双方外周血染色体检查核型正常，男方无精子畸形。

（2）、正常妊娠对照组，随机选择正常妊娠妇女74例，年龄23—28岁，孕周26—41周。

2、方法：（1）基因组DNA抽取采用酚/氯仿法。

（2）PAI-I 基因扩增：引物位于5ˊ端启动子区，序列参照文献[2]的方法设计，由sangon公司合成。

上游引物为；5，CACAGAGTCTGGCCACGT3，（C为非配对碱基）：下游引物为：CAGCCACGTGATTGTCATGGT3，。

潍坊市人民医院产二科（261041）
PCR反应体系为25ul，含基因组DNA100ng，10×PCR缓冲液2.5ul，mgcl21.3mmol；dNTP s各0.2mmol，引物各0.3umol，TagDNA聚合1.0U。

PTC-100型扩增仪（美国MJ公司生产），循环参数：94℃30s、57℃30s、72℃30s35个循环，最后72℃延伸10min。

经2.5%琼脂糖凝胶电泳，EB 染色检测PCR产物。

（3）、限制性内切酶消化及电泳分型：酶切反应体系20ul，含PCR产物3ul，限制酶BsII8U，10×酶切缓冲液2 ul，混匀后置55℃水浴，消化2.5h。

12%的中性聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染显色分析结果。

3、统计学方法：应用基因计数法计算基因频率基因型频率和等位基因频率的比较采用x2检验，组间均数比较采用t检验。

二、结果：
1、PAI-I基因多态性检测电泳结果
PAI-I基因4G/5 G多态性是指在转录起始上游675bp处存在1个鸟苷（G）插入或缺失，表现3种多态性，PAI-I基因PCR产物为142bp，经BSII酶切消化后产生不同的特异性片段，形成3种基因型。

产生96bp和46bp2条带，即为4G/4 G基因型，产生74、46和22 bp3条带，即为5G/5G基因型，产生96、74、46和22 bp4条带，即为4G/5G 基因型，其中22 bp条带在12%PAGE电泳2.5h后跑出胶外。

自然流产组4G/4 G型占39.4%（30/76），4G/5G型占43.4%（33/76），5G/5G 型占17.2%（13/76）。

对照组4G/4 G型占14.9%（11/74），4G/5G型占58.1%（43/74），5G/5G型占27.02%（20/74）。

两组比较，自然流产组4G/4G基因型频率显著高于妊娠组（p〈0.01〉，4G等位基因
频率也显著高于对照组（P〈0.01〉。

两组人群PAI-I基因型和等位基因频率分布
组别n 基因型频率等位基因频率4G/4G 4G/5G 5G/5G 4G 5G
自然流产组76 30(39.4%) 33(43.4%) 13(17.2%) 0.612 0.388 正常妊娠组74 11(14.9%) 43(58.1%) 20(27.02%) 0.439 0.561 三、讨论：
PAI-I基因4G/5G多态性与血浆PAI-I的水平密切相关，存在基
因型依赖关系，4G/4G基因型个体PAI-I的水平高于人群平均值约
21%[4]；临床资料也证实，4G/4G基因型和4G等位基因与冠心病、
急性冠脉综合征、视网膜静脉血栓发生也密切相关[4]。

反复自然流产的病因复杂，除免疫失调、内分泌紊乱、感染、染
色体异常等因素外，基因多态性与自然流产也有关联，Glueck等[3]
对122例妇女做了Leiden V因子、亚甲基四氢叶酸还原酶、凝血酶
原和PAI-I基因4G/5G多态分析，发现存在基因突变的妇女发生早产、
宫内发育迟缓的百分率明显增加，基因突变组妇女发生妊娠合并症者
为37%，无基因突变组为21%，认为4G/4G基因型是严重妊娠合并
症的独立危险因素。

本结果表明，76例不明原因反复自然流产的妇
女PAI-I基因4G/4G基因型和4G等位基因频率显著高于正常妊娠组
妇女（p〈0.01〉，提示PAI-I基因4G/5G多态性与不明原因反复自然
流产密切相关，4G/4G基因型是不明原因反复自然流产的易感基因
型。

但PAI-I基因多态性参与自然流产发病的可能的遗传学机制，目
前尚不明确，有待于进一步探讨。

参考文献
1、Juvan-Vague I，Alessi MC.Plasminogen activator inhibitor-l
and atherorombosis. Thromb Haemost，1993，70：138—143。

2、Visanji JM，seargent J，Tahri D，et al.Influence of the 675
4G/5Gdimorphism of the plasminogen activator inhibitor
promoter on thrombotic risk in patients with factor V
Leiden.Br J Haematol，2000，110：135—138.
3、Glueck CJ Phillips H ，Cameron D，et al.The 4G/5G
polymorphism of the hypofibrinolytic plasminogen activator
inhibitor type I gene：an independent risk factor for serious
pregnancy complications. Metabolism, 2000,49:845-852.
Iwai N ,Shimoike H,Nakamura Y,et al.The 4G/5G polymorphism of the plasminogen avtivator inhibitor gene is associated with the time course of progression to acute coronary syndromes .Atherosclerosis,1998,136:109-114.
4、。