细胞DNA 定量分析在脱落细胞学诊断中的应用王永军，王珩，刘世正，杨会钗，王小玲，王占东，郭明，杜芸摘要：目的探讨自动细胞DNA 定量分析系统在良恶性胸水、腹水、心包积液及乳腺包块诊断中的价值。
方法297例浆膜腔积液（胸水185例、腹水94例、心包积液18例），经细胞采集器处理，每例制成4张薄层细胞片，2张细胞片做巴氏染色，用于常规细胞学检查。
另2张经Feulgen 染色，用自动细胞DNA 定量分析系统检测。
122例乳腺包块住院患者，诊断医师进行针吸穿刺后每例制成2张薄层涂片，1张涂片做巴氏染色，用于常规细胞学检查。
另1张经Feulgen 染色，用自动细胞DNA 定量分析系统检测。
每例均有病理结果证实。
结果297例浆膜腔积液标本常规检测138例（44.5%）异常，而同样的标本中DNA 定量检测131例（44.1%）异常。
常规细胞学诊断为癌及可疑癌细胞84例中100%出现异倍体细胞，常规诊断为找到异型细胞的54中有47例（87%）出现异倍体细胞。
122例乳腺肿物经病理证实，41例为乳腺良性肿瘤，81例为恶性。
常规细胞学方法对良恶性乳腺包块的诊断阳性率分别为92.7%、91.4%，AICM 的诊断阳性率分别为100%、90.1%。
结论应用自动细胞DNA 定量分析系统可弥补常规形态学工作的不足，二者协同诊断，可发现早期癌变的细胞，提高诊断率，为临床制定治疗方案提供有价值的信息，使细胞学检查工作更完善、客观。
关键词：细胞学；DNA 分析；异倍体中图分类号：Q 24文献标识码：A文章编号：1001－7399（2011）02－0150－04Celluar DNA quantitative analysis in cytology for clincal application in diagnosisWANG Yong-jun ，WANG Heng ，LIU Shi-zheng ，YANG Hui-chai ，WANG Xiao-ling ，WANG Zhan-dong ，GUO Ming ，DU Yun （Department of Pathology ，the Fouth Hospital of Hebei Medical University ，Shijiazhuang 050011，China ）Abstract ：PurposeTo differentially diagnose the benign and malignant ，peritioneal effusions ，pericarditis effusions and breast massesby using automatic imaging cytometer．MethodsIn 297samples of serous effusions ，including 185samples of hydrothorax ，94peri-tioneal effusions ，18pericarditis effusions ）were processed with a cell collectioner ，4slides were prepared for each sample ：2sliders were stained by Papanicolaou method for cytology analysis ，and other 2sliders were stained with Feulgen method for DNA imaging cy-tometer．In 122patients with breast masses ，2smears were prepared by fine-needle aspiration puncture for each patient ：1for Papanico-laou stain for cytology analysis ，and other 1for Feulgen stain for DNA imaging cytometer．Pathological results were confirmed in each case．ResultsIn 297samples of serous effusion ，138（44.5%）were abnormal by cytology analysis ，and 131（44.1%）were abnormalby DNA imaging cytometer．By cytology analysis 84were found as cancer cells and dubious cells ，and 100%were found heteroploid cells．By cytology analysis 54were found a few proliferating cells ，and 47（87%）were found heteroploid cells．In the pathologically confirmed breast masses ，41were classified as benign and other 81as malignant．Cytological investigation showed 92.7%sensitivity for benign and 91.4%sensitivity for malignant ，while DNA imaging analysis revealed 100%sensitivity for benign and 90.1%sensitiv-ity for malignant．ConclusionsThe automatic imaging cytometer can remedy insufficiency of routine cytology ，and collaboration of thetwo methods could improve the diagnostic rate of breast cancer ，which provides valuable information for clinical manegement and makes cytology analysis more perfective and objective．Key words ：cytology ；DNA analysis ；heteroploicl cells收稿日期：2010－04－20基金项目：河北省科技厅科技支撑计划（09276174）作者单位：河北医科大学第四医院病理科，石家庄050011作者简介：王永军，女，副主任技师。
Tel ：（0311）86095374，E-mail ：shan_jianli@126．com王小玲，女，硕士生导师，教授，通讯作者。
Tel ：（0311）86095663，E-mail ：wangxiaoling5412@163．com疾病的诊断，既要从整体、器官和细胞水平上认识和分析，还应从蛋白质、mRNA 和DNA 水平上来认识和分析［1］。
随着新技术的发展，肿瘤细胞DNA含量的研究被广泛、深入的应用，使肿瘤的研究提高到了定量研究的分子水平。
细胞病理学医师除对病变作出诊断外，还应考虑到细胞学的改变与制定治疗方案和评估预后的关系，而DNA 定量分析技术能在形态学改变的基础上提供更准确、客观、重复性好的增添信息［2］。
因此利用脱落细胞常规检测结合细胞DNA 定量分析，可以极大的完善脱落细胞的检查工作，使其更加准确、快捷，为临床治疗提供有价值的信息。
1材料与方法1．1临床资料选取2009年5月 10月间河北医科大学第四医院住院患者所送病理科的浆膜腔积液标本297例（其中胸水标本185例、腹水标本94例、心包积液18例）。
122例乳腺包块住院病人行穿刺细胞学检查，详细记录其病史、症状、乳腺包块大小并追踪术后病理结果。
1．2方法将所送胸、腹水及心包积液标本经一次性细胞采集器采集处理后，分别制备4张薄层涂片，2张用于常规巴氏染色，2张用于DNA染色程序（Feulgen染色法）。
乳腺包块患者经细胞学医师用20ml针管7号针头注射器在患者包块中央位置抽吸少许细胞，按常规进行细胞涂片。
每位患者分别制备2张薄层涂片，1张用于常规巴氏染色，1张用于DNA染色程序。
1．2．1常规细胞学诊断所有巴氏染色片由细胞病理学医师做出。
浆膜腔积液标本常规细胞学诊断结果分为4类：①未找到癌细胞；②找到癌细胞；③找到可疑癌细胞；④找到少许异型细胞。
乳腺针吸诊断结果分为3类：①增生的乳管上皮细胞；②重度增生的乳管上皮细胞；③找到癌细胞。
1．2．2细胞DNA定量分析所有Feulgen染色片用全自动细胞图像分析系统（AICM）行扫描处理［3，4］，系统对每张玻片上4000个以上细胞核进行扫描。
根据细胞DNA定量分析系统所做的分析结果有如下3种情况：①以正常2C细胞为主，未见异倍体细胞及异倍体细胞峰；②出现DNA指数（DI）＞2.5细胞和1 2之间的细胞数高于被检测细胞总数的10%；③出现异倍体细胞峰及大量DI≥2.5细胞（即≥5C细胞）。
凡是有DI＞2.5以上细胞的玻片，都要通过细胞诊断医师在显微镜下逐一对DI ＞2.5细胞进行核实，以排除系统将垃圾和重叠细胞误认为癌细胞或异常细胞。
1．2．3组织病理学诊断所有做过针吸及DNA检测的乳腺包块患者，其术后病理由病理医师进行大体取材及诊断。
乳腺癌标本均有组织学分类及淋巴结转移情况。
2结果在297例浆膜腔积液标本中常规发现159例（53.5%）正常，138例（44.5%）异常，异常包括70例（23.6%）找到癌细胞，14例（4.7%）找到可疑癌细胞，54例（18.2%）找到少许异型细胞。
而同样的标本中DNA定量检测166例（55.9%）正常，131例（44.1%）异常（有DI＞2.5细胞或异倍体细胞峰）。
常规细胞学诊断找到癌细胞的为70例，而细胞DNA定量分析出现大量异倍体细胞的高达90例（表1）。
122例乳腺包块患者中，经临床病理诊断证实41例为良性肿瘤，6例为乳腺腺上皮重度不典型增生癌变，75例乳腺癌。
常规细胞学对良性肿瘤的正确诊断率为92.7%（38/41），AICM DNA诊断正确诊断率为100%（41/41）；常规细胞学对恶性肿瘤诊断阳性率91.4%（74/81），AICM DNA定量诊断阳性率90.1%（73/81表2）。
良性与恶性肿瘤中AICM扫描细胞点阵分布图有所不同。