IFN2γ广泛应用于抗病毒、抗肿瘤和免疫调节。
体内外实验研究表明还具有抗vS MCs增生和抑制血管内膜形成的作用。
在我们的实验体系中,给予实验动物皮下注射rIFN2γ(1万U・kg-1・d-1),结果显示rIFN2γ可显著抑制1周和2周时内膜面积,抑制率分别为60100%和66167%;考虑内膜增生与管腔大小的关系更能反映内膜形成对血管腔的影响,我们计算了内膜面积与管腔面积的比值,发现rIFN2γ显著抑制1周和2周时内膜面积与管腔面积比值,抑制率分别为66167%和76170%;抑制1周和1个月时内膜vS MCs表达PC NA,抑制率分别为88150%和58189%。
在一份研究报告中显示,IFN2γ可抑制大鼠再狭窄模型病变中75%的血管vS MCs增生,血管内膜面积减少50%。
本实验中,rIFN2γ对早期(1周和2周)的内膜形成具有显著抑制作用,但对后期(1月)改变作用不明显,从我们对病变的动态观察发现,在损伤后第2周细胞间质已经开始增多,仅靠近管腔的vS MCs保持增生状态,于1个月时细胞外基质逐渐成为新生内膜的主要成分,因此可能对rIFN2γ的作用不甚敏感。
可见rIFN2γ早期治疗决定了内膜增生的远期效应。
另外,rIFN2γ对2周时内膜PC NA表达的影响无显著性可能与vS MCs增生周期有关;或许是损伤后第2周内膜细胞开始以合成细胞外基质为主,此时rIFN2γ可能主要参与vS MCs 分化的调节而对其增生不甚敏感之故[5]。
根据近几年的研究结果,IFN2γ可能主要通过以下几个途径抑制血管vS MCs增生和内膜病变形成的:(1)IFN2γ刺激后以一氧化氮(NO)依赖性机制诱导vS MCs的凋亡,即NO对vS MCs发挥了局部细胞毒作用[6];
(2)通过活化可溶性鸟苷酸环化酶来增加vS MCs中cG MP水平,抑制vS MCs增殖的第二信使系统使vS MCs的DNA合成能力下降[7];(3)通过抑制白细胞介素Ⅰ和血小板衍生生长因子诱导的vS MCs DNA 合成抑制vS MCs增生;抑制PDG F2BB诱导的c2fos高表达并通过改变c2fos表达来控制调节vS MCs由中膜向内膜的迁移和转化[8];此外,IFN2γ减少vS MCs 中表皮细胞生长因子受体的表达;在其它细胞因子共同作用下也可减少血管紧张素Ⅱ受体mRNA表达,认为这亦是通过NO依赖机制而实现的[9];(4)诱导2’25’2寡腺嘌呤合成酶mRNA表达及酶的生成,此酶可激活内源性RNA酶使RNA降解,抑制多种生长因子的mRNA表达和蛋白合成,从而抑制vS MCs的增生[8]。
值得重视的是血管局部产生的IFN2γ可能是vS MCs的内源性抑制剂,在维持再狭窄血管内膜vS MCs量的动态平衡中可能具重要作用。
我们也观察到在内膜受损后的各个时期,增生的内膜中除了主要有vS MCs构成外还可见少数散在浸润的淋巴细胞和巨噬细胞等,这些细胞可能是内源性IFN2γ的主要来源。
因此,面临的问题是怎样利用基因工程技术发挥内源性IFN2γ的作用。
我们的研究结果表明,虽然IFN2γ可显著抑制血管vS MCs的增生,但仅部分限制了新生内膜的形成。
血管壁vS MCs的增生和新生内膜的形成,最终导致再狭窄的发生机制是极其复杂的,尽管如此,我们为再狭窄的防治寻找到又一可行的途径。
4 参考文献
1 袁晋青.分子生物学与经皮冠状动脉腔内成形术后再狭窄的预防.中国循环杂志,1996,11(11):697～700.
2 钱济先,钱兆奇.γ干扰素抑制血管平滑肌细胞增生.国外医学创伤与外科基本问题分册,1998,19(3):146～148.
3 M orim oto S,M izuno Y,H iramitsu S,et al.Restenosis after PTCA2a histopathological study using autopsied hearts.Jpn Circ J,1990,54:43～
56.
4 W ilcox JN.M olecular biology:Insight into the causes and prevention of restenosis after arterial intervention.Am J Cardiol,1993,72:88～95E. 5 Shim okado K,Y okota T,K ato N,et al.Bidirectional regulation of sm ooth muscle cell proliferation by IFN2gamma.J Atheroscler Thromb,1994, (suppl1):29～33.
6 S irsjo A,S oderkvist P,Sundqvist T,et al.Different induction mechanisms of mRNA for inducible nitric oxide synthase in rat sm ooth muscle cells in culture and in aortic strips.FE BS Lett,1994,338(2):191～196.
7 Beasley D,M cguiggin M.Interleukin1activates s oluble guanylate cyclase in human vascular sm ooth muscle cells through a novel nitric oxide2inde2 pendent pathway.J Exp M ed,1994,179(1):71～80.
8
W amer S JC,Fiedman G B,Libby P.Immune interferon inhibits prolifera2
tion and induce2’25’2olig oadenylate synthetase gene expression in human
vascular sm ooth muscle cells.J Clin Invest,1989,83:1174～1182.
9 Sasamura H,Z akazato Y,Hayashida T,et al.Regulation of vascular type
1angiotensin receptors by cytokines.Hypertension,1997,30(1pt1):35
～41.
影响样本量大小的几个因素
样本量的大小,一般与以下几个因素有关:①处理效果:效果越明显,所需的样本量越小;②实验误差:误差越小,越易达到统计学显著性,所需样本越小;③抽样误差:样本的个体差异越小,反应越一致,所需样本越小;④资料的性质:一般计数资料样本需要大些,计量资料样本量相对小些。
本刊编辑部
11实用医学杂志2000年第16卷第1期。