1. 目的
为规范磁珠分选T淋巴细胞，获取高纯度和高质量的T淋巴细胞。

2. 范围
适用于T细胞分选生产的操作过程。

3. 职责
3.1 生产部负责操作和清场。

3.2 质量管理部QA负责监督。

4. 仪器、试剂和耗材
4.1 仪器：生物安全柜；移液枪；离心机；细胞计数仪；QuadroMACS Starting kit(LS) 4.2 试剂：Pan T Cell Isolation Kit（Miltenyi）；PBS；RPMI1640；台盼蓝；AB血清；
4.3 耗材：15/50mL离心管；25mL移液管；10mL移液管；
5. 标准操作程序
5.1 打开生物安全柜，紫外灯照射灭菌30min，通风10min后待用。

5.2 缓冲液配制：PBS加0.5%人AB血清和2mM EDTA，用前去气泡；缓冲液放4度冰箱预冷。

全程保持低温。

5.3安装：将支撑架和分离器用酒精消毒后，放入生物安全柜。

将分离器平行贴到支撑架的垂直面上，移动分离器调整高度。

取出LS柱，安装到分离器的磁力槽中。

5.4 用细胞计数仪计数，计算细胞数目。

5.5 离心1000rpm，8min收集细胞，完全去掉上清。

5.6 按照每107细胞加40ul buffer的量加缓冲液重悬细胞。

5.7 每107细胞加10ul Pan T Cell Biotin-Antibody Cocktail。

5.8 混匀，4℃冰箱孵育5min。

5.9 每107细胞加30ul 缓冲液。

5.10每107细胞加20ul Pan T Cell Microbead。

5.11 混匀，4℃冰箱孵育10min。

5.12 加400 ul 缓冲液，混匀（至少500ul上柱）。

5.13 用3ml缓冲液润洗柱子。

5.14 把细胞悬液加入到柱子中。

收集流出的T细胞。

5.15 用3ml缓冲液洗涤柱子，收集流出的T细胞。

与5.14的合并。

5.16 从分离器上取下柱子，安放到合适的收集管中。

5.17 加入5ml 缓冲液到柱子中，立即将活塞插入柱子，用力将液体压出，即为非T细胞。

5.18 取样，台盼蓝染色后在细胞计数仪上计数。

5.19 关闭生物安全柜，进行清场操作。

5.20 填写相关记录文件。

6. 相关文件
无
7. 相关记录
7.1《T细胞分选生产记录》
8. 附件清单
无。