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实时荧光定量PCR仪性能指标对比
ALEXA Fluor ® 350 (350nm440nm), FAM ™/SYBR® Green I (492nm516nm), TET (517nm538nm), HEX ™/JOE™/VIC ™ (535nm555nm), Cy3™ (545nm568nm), TAMRA™ (556nm580nm), ROX ™/Texas Red® (585nm610nm), and Cy5™ (635nm665nm).
Stratage Stratage ne ne Mx3000 Mx3005 P P
ABI, Prism 7500
Eppend ABI Step RotorBio-Rad orf:2 / 4 One/Plu Gene CFX96 Color s 6000 Systems
5-100ul (通常 20ul)
软件功能比 较强大。
Stratagene定量软件的操作简单,有口皆碑!
Stratage Stratage ne ne Mx3000 Mx3005 P P
1.开放的系 统,宽广的 波长范围, 能采用所有 的定量探针 染料 . 2.孔间 温差小,实 验重复性好 。 3. 采用 PMT检测, 减少激发光 、检测光交 叉干扰,提 高灵敏度 4.软件功能 强大,但非 常简单易用 5,机器内置 芯片能保存 数据,电脑 死机等情况 不会丢失数 据。 6,5通 道配置,支 持FRET应用 。7,完全的 荧光定量 PCR培训项 目。8,个人 化的荧光定 量PCR仪
激发光与发射光的双重过滤能排除杂光的影 响,从而提高检测的准确性
样品通量
96孔
96孔
96孔
48孔/96孔
96孔
96孔
36/72/100 365nm/470 nm/530nm/ 585nm/625 nm/680nm/ 460nm
32
96/38 4
96孔通量高,可以采用多孔板方便操作。
激发光范 350-750nm 350-750nm 围
光源
石英卤钨灯 石英卤钨灯
卤钨灯
蓝光LED
6个LED
96个蓝光
LED
LED
1个LED
氙灯
石英卤灯激发范围宽广,光强强,非常适合做 多通道的定量PCR,LED的激发光源是冷光源 相对 寿命相对也要长,但是光强度低,光的 激发范围受限制。
通道
4 通道
5通道
5通道其中一 个为校正染 料通道
3通道
5
2/4通道
Stratagene的可用染料最多,开放性最好
Stratage Stratage ne ne Mx3000 Mx3005 P P
检测动态 范围 温度均一 性
10个 10个
ABI, Prism 7500
Eppend ABI Step RotorBio-Rad orf:2 / 4 One/Plu Gene CFX96 Color s 6000 Systems
450-730 nm
530, 640 ,705nm/ 460nm/510 530, nm/555nm/ 560,610, 430-630nm 610nm/660 640 , nm 670, 705nm
Stratagene检测光范围最宽广
可用荧光 染料
ALEXA Fluor® 350 (350nm440nm), FAM ™/SYBR® Green I (492nm516nm), TET (517nm538nm), HEX ™/JOE™/VIC ™ (535nm555nm), Cy3 ™ (545nm568nm), TAMRA™ (556nm580nm), ROX ™/Texas Red ® (585nm610nm), and Cy5™ (635nm665nm).
2、4、5、6 不等
3块检测滤光 片/6块检测 滤光片
五通道
多通道是定量PCR发展的趋势,现在多通道的 荧光定量实验也越来越多,主流的是4通道
检测器
PMT
PMT
冷CCD
6个光电二极 1/2个PMT 光电二极管 管
PMT
光电二极管
CCD
采用CCD检测器具有边缘效应,做实验时必须 加入校正染料。采用PMT检测器,能将光信号 放大,检测灵敏度高,无需校正染料。发光二 极管的检测灵敏度低。
实时荧光定量PCR仪比较表
Stratage Stratage ne ne Mx3000 Mx3005 P P ABI, Prism 7500 Eppend ABI Step RotorBio-Rad orf:2 / 4 One/Plu Gene CFX96 Color s 6000 Systems Roche LightCy cler 1.5/2.0 Roche LC480 简 评
FAM™ /SYBR® Green FAM™ I,VIC™ /SYBR® Green, VIC /JOE ™,NED/TA ®/JOE™, and ROX™ MRA™ /CY3,和 ROX™ CY5
FAM™ LightCycle /SYBR® r®Cyan Green 500/ SYBR SYBR® I,TET,HE FAM/SYB,L Green I/ 没有明确注 Green, C610.LC71 X VIC™ FAM/ 明可用染 FAM, VIC, 0(2.0增加 料, HEC(VIC)/ /JOE,/TA HEX TET, HEX, SybrGreen I LightCycle MRA ™ ,JOE,640,6 ROX, JOE, 可用 r®Red 610/ 70) TAMRA /CY3,Texa LightCycle s Red和 r®Red 640/ ROX™ Cy5 CY5
Roche LC480
简
评
软件功能强 大,支持绝 对定量分析 、基因表达 软件易用 差异分析、 SNP分析等不 性 同应用模式 、操作非常 方便简单, 界面直观。
软件功能强 大,支持绝 对定量分析 、基因表达 差异分析、 标准曲线分 SNP分析等不 绝对定量 析,Δ CT与 同应用模式 (标准曲 Δ Δ CT进行 、操作非常 软件操作复 线)、Δ Δ 相对定量分 方便简单, 杂、单个软 CT进行相对 析,基因分 界面直观。 件功能薄弱 定量分析、 型、读板实 支持激发光 。 基因分型、 验。数据输 滤光片与发 融解曲线分 出方便。具 射光滤光片 析 有e-mail提 的单独控 醒功能。 制,能形成 滤光片的错 配,从而来 满足 FRET应 用。
15度/秒
0.1-20度/秒
升4.8度/秒, 降2.5度/秒
相比同类型产品,Stratagene的升降温速度快
检测灵敏 度(准确 性)
单拷贝(区 别5000个拷 贝与10000 个拷贝的可 信度为 99.7%)
单拷贝(区 别5000个拷 贝与10000 个拷贝的可 信度为 99.7%)
≤50 fM fluorescein
PCR反应的一般体积都是20-50ul
试剂和耗 材
开放
开放(支持 专门为 ABI专用耗材 FRET) Taqman设计 (0.1mL)
低缘管
开放
快速PCR 功能
与Full 与Full Velocity配 Velocity配 合使用可以 合使用可以 快速至 50分 快速至 50分 钟完成 钟完成
无
有,快速功 能40分钟内 完成
Roche LightCy cler 1.5/2.0
Roche 80
简
评
反应体积
10~100uL
10~100uL
20~100uL
10-30uL
1~50uL
20ul-100ul 10uL-100uL 的毛细管 (96 well) (反应体积 and 5uL20uL (384 可最少到 well) 5ul)
单拷贝
单拷贝
单拷贝
升降温方 式
Peltier半导 体
Peltier半导 体
Peltier半导 体/step one plus 使用 Peltier半导 Peltier半导 VeriFlex 技 体 体 术分为6个 独立控制区 域
Peltier半导 体
空气加热制 空气加热制 冷 冷
Peltier半导 半导体加热制冷控温更加精确。空气加热制冷 体 虽然快速,但是控温不精确。
5通道,能与 Taqman探 针很好的匹 配,软件使 用麻烦,需 要校正染料 。仪器搬动 后需要校正 光路。有引 物探针设计 软件,但只 能设计引物 与Taqman探 针。有单独 的相对定量 软件。
目前StepOne 系列的光学 系统没有详 细信息。只 是知道LED激 发所有的孔 。
具有梯度 和快速功 能 LED+光电 二极管 (检测灵 敏度值得 怀疑); 逐孔扫描 (光源移 动);操 作温度30100℃
激发端没有 5个激发端 4个激发光滤 5个激发光 5个激发光 带有3个/4个 3个/6个发射 6个激发与6 滤光片发射 滤光片和6 检测滤镜片 光检测滤光 滤光系统 镜与4个发射 滤镜与5个 滤镜与5个 检测端滤光 个检测 端有2/4个滤 个检测断滤 发射光滤镜 发射光滤镜 光滤镜 片 镜 光片 光片
9个 9个
Roche LightCy cler 1.5/2.0
9个
Roche LC480
简
评
9个
9
10个
10
宽广的动态范围有利于摸索实验条件
(+/-)0 .25
(+/-)0 .25
(+/-)0.5
± 0.5 ° C
±0.4° C
± 0.4 ° C
+/-0.01
(+/-)0.4
(+/-)0 .35
Stratagene改进了传统的模块加热方式,使得 温度非常均匀,实验的重复性更好
ABI, Prism 7500