产品以冻干粉的形式，常温运输。
收到产品后，请于-20 C〜-80 'C保存，冻干粉可以稳定保存一年。
使用前请瞬时离心，用RNase-freeH 2O或者灭菌ddH20，配制成20gM储存液，分装保存，避免反复冻
融（尽量不超过5次）。
表120 gM储存液的配置参考
使用前须知
为避免外界因素（包括酶，极端pH或者温度条件等）导致产品降解，所有操作请严格遵循RNA操作规则。
实验过程中，产品最好于冰上放置，使用完毕后请于-20 C~-80 C小心保存。
细胞实验方法
为了降低细胞密度、试剂用量，转染效率等因素导致的孔间差异，保证实验可靠性和可重复性，一般建议：
a. 转染实验中每个转染样品至少设置3个以上复孔；
b. 接种细胞时，每孔接种的细胞数量尽量保持一致，并且细胞在各孔的表面平均分布。
1. 转染浓度：
siRNA产品最佳工作浓度因不同的细胞类型及研究目的而异。
推荐初始转染浓度为50nM，转染后检测时
间为24〜72h。
最佳转染效率一般通过设置时间曲线和浓度梯度进行优化，优化的范围建议为5~100nM。
2. 转染步骤：
以Iipofectamine2000（简称Iipo2000）转染siRNA于24孔板，转染浓度为50nM为例，其他规格容器转染
请参考表2。
1）转染前一天，接种适当数量的细胞至细胞培养板中，每孔中加入不含抗生素的培养基，使转染时的细胞
密度能够达到30~50%（不同细胞生长速度不一样，因此，接种细胞的数量需要根据细胞培养的经验）。
注意: 转染时，细胞密度是影响转染效率的关键因素之一，细胞生长过度会削弱细胞活力，降低细胞的转染效率。
2）对于每个转染样品，请按以下步骤准备siRNA-Iipo2000混合液：
a. 稀释siRNA :用50 g 不含血清培养基Opti-MEM I （v1）稀释g I20 gM siRNA储存液，轻轻混匀，室温孵育5min ;
b. 稀释Iipo2000 :用50 g不含血清培养基Opti-MEM I （v1）稀释1 g Ilipo2000，轻轻混匀并室温孵育5min ;
c. 将a与b轻轻混匀，室温孵育20min（溶液可能会有浑浊，但不会影响转染）。
注意：稀释好的Iipo2000长时间放置可能导致转染试剂活性的降低，应尽量在25min之内与稀释好的siRNA
混合。
另在混合试剂时，请勿剧烈吹打或振荡，手指轻弹管壁即可，过度用力可能会破坏脂质体的结构，
甚至影响siRNA-lipo2000 混合物的形成。
3）将siRNA-Iipo2000混合液加入含有细胞的400 gl培养基（v2）的培养孔中，轻轻混匀；
4）（可选）培养4〜6h后，将孔中含siRNA-Iipo2000混合液的培养基移去，更换新鲜培养基；
5）（可选）进行其他必要的特殊处理（如加药处理）；
6）将培养板置于37'C的C02培养箱中培养24〜96h（培养时间与实验目的相关）。
表2使用Iipo2000（invitrogen）转染siRNA 产品用量参考
v1 : Opti-MEMI（无血清、无抗生素，转染专用）；v2 :完全或不完全培养基
96-well
100 卩l（25 卩l+25 卩l+50
卩l）100nM gl gl10~100ng 100 卩l（25 卩l+25 卩l+50
卩l）50nM A1g】10~100ng 100 卩l（25 卩l+25 卩l+50
卩l）30nM g1g】10~100ng 100 卩l（25 卩l+25 卩l+50
卩l）20nM gl gl10~100ng 100 卩l（25 卩l+25 卩l+50
卩l）10nM g1A
1
10~100ng 24-well
500 卩l（50 卩l+50 卩l+400
卩l）
100nM gl 1 gl100~200ng
*500 卩l（50 卩l+50 卩l+400
卩l）
50nM gl 1 gl100~200ng 500 卩l（50 卩l+50 卩l+400
卩l）30nM gl 1 gl100~200ng 500 卩l（50 卩l+50 卩l+400
卩l）20nM gl 1 gl100~200ng 500 卩l（50 卩l+50 卩l+400
卩l）10nM gl 1 gl100~200ng 12-well
1mL （100 卩l+100 卩l+800
卩l）100nM 5 gl 2 gl200~400ng 1mL（100 卩l+100 卩l+800 卩
l）50nM gl 2 gl200~400ng 1mL（100 卩l+100 卩l+800 卩
l）30nM g】 2 gl200~400ng 1mL（100 卩l+100 卩l+800 卩
l）20nM 1 gl 2 gl200~400ng 1mL（100 卩l+100 卩l+800 卩
l）10nM gl 2 gl200~400ng 2mL（250 g l+250 g l+1500 g l）50nM 5 gl 5 gl500~1000ng
2mL（250 g l+250 g l+1500 g l）30nM 3 gl 5 gl500~1000ng
2mL（250 g l+250 g l+1500 g l）20nM 2 gl 5 gl500~1000ng
2mL（250 g l+250 g l+1500 g l）10nM 1 gl 5 gl500~1000ng
2mL（250 卩l+250 卩1+1500
卩l）卩
卩
* :实验参考用量示例；：当实验涉及DNA共转时参考
3.效果检测:
转染完成后24~72小时均可进行siRNA沉默效果检测，最佳检测时间与细胞类型，转染试剂，检测目的等
相
关。
1）RNA水平的检测：mRNA是检测siRNA沉默效率的最佳指标，siRNA转染后24~72h即可检测到靶基因mRNA表达明显降低，检测方法宜采用qPCR检测方法。
注：引物设计质量很重要;
2）蛋白水平的检测：蛋白是RNAi沉默效率的重要指标，其检测手段主要为Western-blot等。
检测时间受
细胞内蛋白质表达量、半衰期等因素的影响，一般为48~96h，甚至更长时间之后多点采样;
3）功能筛选：应用EdU细胞增殖、EdUTP细胞凋亡等检测方法进行siRNA对细胞功能的直接筛选。