操作时差对检测乙型肝炎核心抗体的影响
【摘要】探讨乙型肝炎病毒血清免疫学标志物检测中，操作时差对结果的影响程度。

乙型肝炎病毒（hbv）核心抗体是人体受hbv 感染后血清中最早出现的标志性抗体［1］，它持续的时间长，几乎所有的个体在感染hbv后都能产生核心抗体。

乙型肝炎病毒（hbv）核心抗体是乙肝流行病学调查的良好指标。

因此对乙型肝炎核心抗体检测的准确性要求日益提高，要避免因为操作时差对检测的影响。

【关键词】酶联免疫吸附试验；操作时差；乙型肝炎病毒核心抗体
检测乙型肝炎病毒核心抗体（抗-hbc）目前最常用的方法是酶联免疫一步竞争法，它的操作简便，我们以此为例作为探讨的对象。

通过不同加样时间和不同加样顺序的比较来解释操作时差对检测
的影响。

1 材料和方法
1.1 试剂乙型肝炎病毒核心抗体试剂盒，由（上海科华公司）提供。

1.2 试验方法1 先加入酶结合物，放置37℃不同的时间（0、5、10、15、20、30min）以后，再加入1：30稀释标本，按照说明书进行操作。

检测90份乙肝核心抗体阳性样本。

1.3 试验方法2 按试剂盒说明书加入1：30稀释标本50微升，分别静置在水浴37℃和室温（25℃）下0、5、10、15、20、30min，
随后加入酶结合物，37℃水浴，按照说明进行操作［2］。

随机检测30份乙肝核心抗体和乙肝表面抗原都是阴性的样本。

2 结果
表1 加样后放置不同时间对血清核心抗体酶免疫竞争法测定结
果的影响［样本平均吸光度a（阳性例数）］
样本情况份数实验条件加样后静置时间（min）
0 5 10 15 20 30
核心抗体阳性 90 37度水浴 0.187（90） 0.299（84） 0.386（75） 0.434（71） 0.661（66） 0.762（62）
核心抗体阴性 30 37度水浴 1.930（0） 1.525（4） 1.343（8）0.937（11） 0.835（13） 0.682（14）
30 25度室温 1.988（0） 1.632（1） 1.485（5） 1.093（5） 0.963（8） 0.842（10）
从上表可以看到：①按照试验方法1进行操作，随着酶结合物加样时间的延长，样本的平均吸光度a明显上升，其预期的阳性样本的阳性例数明显下降。

②按照试验方法2进行操作，随着样本加样时间的延长，其平均吸光度a明显下降，由于抗-hbc为反结果，预期阴性样本的阳性例数明显上升。

3 讨论
3.1 竞争法检测抗-hbc是“不公平的竞争”现有抗-hbc试剂盒是采用hbcag包被，抗-hbc标记酶结合物。

若加入样本中含有核心抗体，则整个体系会存在一定的竞争，加样的先后顺序和时间的长短会明显影响最终结果的判断。

因此为了避免由于加样时差导致的
影响，必须改进抗-hbc的检测方法，平衡酶标记抗-hbc和样本中抗-hbc对包被体系上的hbcag的竞争。

3.2 在日常工作中，通常都是对标本进行成批的检测每天检测乙肝五项的患者都在数百位以上，因此在实际的操作过程中，加入第一个样本和加入最后一个样本所间隔的时间可能较长，即使是再熟练的检验师最起码也要相隔30分钟以上［3］。

加入酶结合物及混匀等同样都存在不小的时间差异。

这种因为实验导致的时间差异称为是操作时差。

操作时差在一步法的检测中普遍存在，根据实验结果表明，37℃即时加酶与加样40分钟后加酶进行比较，血清核心抗体竞争法测定结果的值随时间降低，阳性率增加，反应温度越高，假阳性率越高［4］。

本文的实验结果证实了以上观点，同样的，加样的先后顺序对检测血清核心抗体的影响也明显存在。

在临床中，常常会遇到单项抗-hbc阳性及一些可疑的阳性结果，而在复查时又发现为阴性，导致这种结果出现的原因是样本两次检测时编号的次序不一致，从而导致操作时差影响酶促反应的进行。

3.3 目前，市场竞争日益严重一些检验工作者一味的希望缩短检测的时间，导致试剂的反应时间越来越短、操作步骤越来越简单，忽视了操作时差对结果产生的影响。

为此建议对操作方法和对试剂盒稀释倍数等进行研究，研制不受操作时差影响、特异性较好的试剂盒［5］。

我们在工作中不要盲目的选择反应时间短和操作简单的
试剂盒，要对检验结果负责，选用可靠的试剂盒。

4 总结
操作时差的影响需要引起足够的重视，每个操作人员都要对自己的检验结果负责任。

对于错误的检测模式绝对不能报告，必须要进行复查；对于少见的检测模式，而又是接近临界值的阳性结果的样本建议最好复查［6］。

要不断的学习和积累实际操作的经验，并努力消除这些影响因素，准确的报告结果能在临床上让医生更好的进行判断和治疗。

参考文献
［1］汤春园，文信江，李山，陈志坚.加样时差及加样时间对时间分辨法检测弱阳性hbsag标本的影响［j］.广西医科大学学报，2008(3)：1458-1460.
［2］滕龙，陈钢，洪加林.酶免疫竞争一步法检测抗乙型肝炎病毒核心抗体的影响因素探讨［j］.中华检验医学杂志，2003(2). ［3］腾龙，陈钢.时差操作对酶免疫竞争法检测乙型肝炎病毒核心抗体结果的影响［j］.中华医学检验杂志，2005(2)：226-228. ［4］曹向红，王胜虎，李懿，李海蜀.操作时差对竞争酶联免疫吸附试验法检测抗-hbc结果的影响［j］.实用医技杂志，2010(4)：210-212.
［5］范恩勇，孙海英.标本的保存温度和时间对血清抗-hiv elisa检测结果的影响［j］.中国输血杂志，2004(1)：45-47. ［6］江帆，胡定远.酶免疫竞争一步法检测乙型肝炎病毒核心
抗体的影响因素探讨［j］.华西医学，2005(03)：356-358.。