HBeAg阳性慢性乙型肝炎 乙型肝炎肝硬化
正常 无炎症或仅有轻 度炎症 非活动性HBsAg 携带者
增高或者波动 中度或严重炎 症、肝纤维化
Hቤተ መጻሕፍቲ ባይዱeAg阴性 慢性乙型肝炎 乙型肝炎肝硬化
临床诊断
乙肝病毒的感染
慢性HBV感染分期及相关实验室检测指标
鲁凤民，庄辉，乙型肝炎实验室诊断研究进展 2009
HBV-DNA与临床
1、荧光定量PCR技术 2、乙肝病毒的感染 3、HBV-DNA与临床
荧光定量PCR技术
荧光定量PCR技术
• Polymerase chain reaction(PCR)，聚合酶链式反应，是 一种DNA的快速扩增技术。PCR技术通过两个短的称为引物 的DNA小片段和一种耐热酶（TaqDNA聚合酶）的作用，经
一般不存在于血循环中
HBcAb: 非保护性抗体，HBcAb-IgM
提示HBV处于复制状态
HBeAg：HBV复制及强感染性的指标 HBeAb：有一定的保护作用，预后良好
乙肝病毒的感染
（二） HBV-DNA与“两对半”
1. “两对半” ：机体的免疫反应状态；
FQ-PCR：检测的是HBV本身的遗传物质—DNA，是 病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标。
处于复制状态，最准确的方法还是通过检测HBV
DNA来决定。
HBV DNA检测的临床意义
HBsAg和HBeAg均阳性而HBV DNA阴性？
●干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。
●PCR所用引物相应的DNA序列发生突变，此引物与突变DNA不能配对结
合。 ●病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBV DNA很少或缺乏。
2. “携带者”、“大三阳”、“小三阳”等免疫学 指标不能 反应体内病毒复制水平与感染程度。 3. 血清学指标(－)不能排除HBV感染。
HBsAg(－) HBV-DNA(＋) HBeAg (－) HBV-DNA(＋)
乙肝病毒的感染
4. 也可能出现HBsAg(＋)，HBV-DNA(－)。
5.HBeAg阳性标本HBV DNA检出率90％左右
3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’
5’
循环3
8个拷贝
3’ 3’
3’
3’
3’
荧光定量PCR原理
插入染料法 SYBR Green I
杂交探针法(最常用) TaqMan
TaqMan探针
3’ 5’ 5’ 3’
Primers
d.NTPs Taq酶
R
反应体系
Q
Probe
HBV DNA检测的临床意义
HBV DNA是HBV存在最直接的依据
HBV DNA是HBV复制的标志
HBV DNA是患者具有传染性的标志 HBV DNA对乙肝两对半起补充作用 HBV DNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标 HBV DNA可检测出隐匿性慢性乙型肝炎
HBV DNA检测的临床意义
乙肝的治疗 目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的
药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到50％左右。
目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗 病毒药物主要有两大类： 干扰素：重组人α -1b干扰素、α - 2a、 α -2b干扰素等。
核苷类似物：拉米夫定、阿德福韦。
乙肝的治疗
主要包括
、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化等
对于HBV
DNA≥105的患者应进行抗病毒治疗
过高温变性、低温退火、适温延伸三个步骤在3个小时内
反复循环25-30次，把特定的DNA片段扩增1000万倍。 • 每个PCR体系含4种主要成分：含有待扩增序列的DNA模板 、引物、TaqDNA聚合酶、脱氧核糖核酸三磷酸（dNTP）
荧光定量PCR技术
实时荧光定量PCR技术，是指在反应体系中加入 ，利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程，通过 对PCR终产物的分析，最终实现对未知的起始
提供直接证据缩短“窗口期”
PCR检测
HBV HCV HIV
“窗口期”
56 70 22
核酸检测缩短的“窗口期”的天数
6-15 41-60 10-15
有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断
HBV DNA检测的临床意义
调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于 HBV复制期，具有传染性；也不是所有“小三阳” 的病人HBV都无复制。因此，要准确知道HBV是否
模版进行定量分析的一种技术，是迄今对已知基因序列的
核酸测定中最灵敏的方法。
PCR 反应过程
3’ 5’ 5’ 3’
Primers
d.NTPs
Taq 酶
反应组分
变
性
3’
5’
5’
3’
退
火
3’
Taq Taq
3’
5’
延 重
伸 复
3’
3’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’
5’
循环2 4个拷贝
3’
3’
3’ 3’ 3’ 3’
Taq
l
R
Q
变
性
Q
5’
R
3’
退 火
R Q
5’
Taq
3’
1. 链取代 2. 水
R Q
5’
Taq
R
5’ 3’
解
Taq
5’
5’ 3’
3. 聚
合
l Taq
5’
R
5’ 3’
4. 检测荧光
乙肝病毒的感染
乙肝病毒的感染
（一）
乙型肝炎病毒结构及特点
HBsAg：是HBV感染的主要标志 HBsAb：保护性抗体 HBcAg：仅存于感染的肝细胞核内，
HBeAg与HBV DNA有着良好的相关性
乙肝病毒的感染 免疫耐受期 免疫清除期 非活动或低（ 非）复制期 再活动期
HBV DNA ALT 肝组织学
HBV DNA贯穿感染者的终生，是评价病毒复制的金标准
正常 无明显异常, 或 轻度炎症纤维化 慢性HBV携带者 增高或者波动 中度或严重炎症、纤 维化快速进展