物细胞融合。
2、电融合：用电融合仪诱导融合，主要用于植物细 胞。
3、聚乙二醇（polythyleneglycol，PEG）诱导：分 子量200－6000都可用，以1000较好。用于诱 导植物原生质体融合和多种动物细胞融合。 优点：材料易得、操作方法简单、效果稳定。
病毒诱导细胞融合的原理及特点
• 原理：病毒导致两细 胞接触处胞膜破坏， 易于融合。
3、混合细胞并洗涤： 肿瘤细胞和鸡红细胞各1ml 混合，吸取0.2ml于EP 管中用作对照；另加6ml Hanks液，混匀后 1000rpm离心5min，弃上清； 再用8 ml Hanks液洗细胞一次，800 rpm离心 5min弃上清，约留0.1ml液体
【实验操作】
4、 PEG介导融合：用手指轻弹离心管底部，使沉 淀松散，然后将离心管放在37ºC水浴中； 吸取预 热至37℃的50％PEG 0.5ml ，逐滴加入到细胞沉 淀中，边加边振摇浑匀，使细胞在50％PEG 中总 时间控制在90秒之内；
融合细胞核数 ×100％ 融合细胞核数＋未融合的细胞核数
【注意事项】
• 保持PEG温度，否则易凝固 • PEG处理时间不宜过长，否则会造成细胞
破坏或有多个细胞彼此融合形成巨大的合 胞体。 • 经PEG处理后加液混匀时应轻轻吹打，以 免刚刚融合的细胞分开。
【参考书】
1、《体外培养的原理与技术》第一版，薛庆 善编，科学出版社。
• 了解聚乙二醇诱导细胞融合的原理与技术； • 学会鉴别融合细胞。
【实验材料及用品】
一、实验材料： 1、鸡红细胞 2、小鼠腹水瘤细胞 二、实验器材 普通离心机 水浴锅：50ºC，37ºC 计数板
三、实验试剂1、180来自U/ml肝素钠生理盐水溶液 2、Hanks溶液 3、50％PEG：将10gPEG加入带盖离心管中，
• 优点：融合率高 • 缺点：不稳定，在保
存过程中融合活性降 低；制备过程繁琐
电融合原理及特点
• 原理：高压电导致细 胞膜产生可恢复的穿 孔
【 PEG法原理】
• PEG可减少细胞间的游离水，使细胞相互 靠近并破坏细胞膜的磷脂双分子层，改变 膜的结构，使细胞相互接触处容易融合在 一起。
【实验目的】
沸水浴加热使PEG熔化；置50℃水浴使其 冷却至50ºC ，加入等体积预热至50 ℃ 的 HanKs液混匀，保存于37 ℃ 水浴中。
【实验操作】
1、调整肿瘤细胞浓度：处死小鼠，抽取腹水，计数 细胞浓度，用Hanks液稀释成个107个/ml
2、配2％鸡红细胞悬液：肝素抗凝鸡血1000rpm离 心5min，去血浆；按红细胞压积用Hanks液配成2 ％悬液（约108个/ml）。
PEG诱导的细胞融合实验
细胞融合（cell fusion）
• 又称细胞杂交（cell hybridization），是指 两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的 现象。
用细胞融合方法培育的薯番茄
细胞融合抗盐碱耐干旱葡萄新品种
细胞融合生产 单克隆抗体
细胞融合的诱导
1、病毒诱导：如仙台病毒（Sendaivirus） ，主要用于动
2、《细胞生物学实验》第二版，杨汉民编， 高等教育出版社。
5、终止PEG作用并离心除去：向试管中缓慢滴加 9ml Hanks液轻轻吹打混匀，在37ºC水浴中静置 5min；1500rpm离心5min，弃上清；
【实验操作】
6、培养：向细胞沉淀中加入2ml 1640完全培养液 轻轻混匀，37℃水浴中培养30min。
7、染色、观察：在EP管中将0.2ml已进行融合处理 的细胞悬液及对照细胞悬液分别与等体积次甲基 蓝染液混合，染色5min；制片观察融合现象（有 无融合、多核融合、双核融合、同种融合、异种 融合）；计数200个细胞，计算异细胞融合率 （融合细胞核数占细胞核总数的百分率）