植物组织过氧化氢含量
的测定
Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】
配制100ml 、100umol/L 的过氧化氢溶液需要多少30%的过氧化氢原液请写出计算过程。

答：首先计算其摩尔浓度：
若30%为其质量百分数
双氧水30%浓度的试剂（上海国药集团出品），室温时实测密度为：1,122g/L，所以，1L 30%含量的双氧水中过氧化氢含量为：1122g/L ×1L×30%=337g
又H2O2的分子量为，那么1L 30%含量的双氧水中过氧化氢浓度为：337/= mol/L.
100ml×10-3×100umol/L×10-6=mol/L×V
V=10-6L=1 ul
若30%为体积分数
100% H2O2密度是1,440 g/L, 30 ml H2O2的质量为1440 g/L ×30
ml×10-3=，30%含量的双氧水中过氧化氢浓度为：= mol/L.
100ml×10-3×100umol/L×10-6=mol/L×V
V=×10-7L= ul
植物组织中过氧化氢含量测定
植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。

H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。

过氧化氢酶可以清除H2O2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。

因此，植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。

本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。

【原理】
H2O2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被H２SO4溶解后，在415nm波长下比色测定。

在一定范围内，其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。

【仪器和用具】
研钵；移液管×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。

【试剂】
100μmol/L H2O2丙酮试剂：取30%分析纯H2O2 57μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（W/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。

【方法】
1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表加入试剂。

待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml刻度，415nm波长下比色。

2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2g，按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000 r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。

(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后5000rpm/min离心10min，弃去上清液。

沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。

(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。

3.结果计算：
植物组织中H2O2含量(μmol/g Fw)=
C Vt FW V
⨯
⨯1
式中 C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度（μmol）； V t—样品提取液总体积（ml）；
V1—测定时用样品提取液体积（ml）；
FW—植物组织鲜重（g）。

得出标准曲线如下图：
测定所得样品的吸光度为，带入得，考虑到称取鲜重代入公式含量为H2O2 =μmol/g Fw。

注意事项
1、离心机离心时应该先配平。

2、加试剂的顺序一定不可以错。

3、每次加完一种试剂后都要充分摇匀。

4、注意所用H2O2的浓度。