细胞总蛋白提取方法
一、溶液配制
1.100mM NaF (NaF MW=41.99) 10ml
称取NaF 41.99mg，超纯水8ml溶解后定容至10ml。

2.100 mM PMSF
3.RIPA溶液100ml
成分分子量终浓度
Tris 121.14 0.6 g 5.0 mM (pH 7.4)
NaCl 58.44 0.87 g 150 mM
EDTA 372.24 37.22 mg 1 mM
NP-40 1 ml 1%
SDS 0.1 g 0.1% 脱氧胆酸钠0.5 g 0.5% 溶解于80 ml超纯水中，待溶解后加入HCl调pH值至7.4，定容至100 ml。

※使用前加入
成分储存浓度加入量终浓度
PMSF 100 mM 10μl/1ml 1 mM
NaF 100 mM 10μl/1ml 1 mM Aprotinin 10μg/μl0.2μl/1ml 2μg/μl
Leupetin 10μg/μl0.2μl/1ml 2μg/μl
二、方法
1.细胞收取
1)细胞传代至60mm培养皿中，待细胞融合约100%，收集细胞
2)弃培养基，加入PBS 2ml清洗培养皿一次，弃PBS。

3)加入0.05%胰酶2ml，37℃温育1min。

4)待细胞变形后，将细胞吹下转移至一个1.5ml
ependorf 管中，10,000rpm×3min，4℃
5)弃上清，1ml预冷的PBS清洗沉淀，10,000rpm×
6)重复PBS清洗一次
7)弃上清，-80℃冻存待裂解
2.蛋白提取
1)向细胞沉淀中加入200μl RIPA缓冲液(含1mM PMS
1mM NaF、2μg/ml Aprotinin、2μg/ml Leupetin)
后冰上放置40mins
2)10,000rpm×15min，4℃
将上清转移至一个新的ependorf 管中（约250μl）。