9×10-8mol/L ACh 3×10-6 mol/L Atr + 9×108mol/L ACh 6×10-7mol/L Adr
5×10-6 mol/L Pro+6×10-7 mol/L Adr
注：* p<0.05,**p<0.01 vs control; # p<0.05,## p<0.01 vs 9×10-8M ACh group
2.5.2 无钙任氏液1ml替换插管内的任氏液，心搏曲线稳定后记录45s。
2.5.3 用任氏液洗脱3次，加入1ml任氏液，待曲线稳定45s后，向灌流液 中加 0.045mol/L CaCl2溶液25l，心搏曲线稳定后记录45s 。
2.5.4 用任氏液洗脱数次，曲线基本恢复后，加入1ml任氏液，待曲线 稳定45s后，在任氏液中加 0.2 mol/L KCl溶液20l，心搏曲线稳定 后记录45s 。
结束阶段： •1人负责数据测量 •1人负责记录 •1人负责整理器械、本组卫生
实验目的(Objectives)：
• 了解离体心脏灌流的方法 • 观察钾、钙离子浓度、肾上腺素、乙酰胆碱对离体蟾
蜍心脏活动的影响并探讨作用机制。
离体心脏灌流法
Straub法
八木氏法
Langendorff法
Langendorff
关于处理因素的实验效应问题
关于心脏收缩机制的问题
关于心脏舒张机制的问题
关于蟾蜍心脏的问题
关于离体蟾蜍心脏标本制备的问题
关于离体蟾蜍心脏Straub法灌流的问题
关于离体蟾蜍心脏灌流的非处理因素的问题
关于离体蟾蜍心脏功能观察指标的的问题 关于离体蟾蜍心搏动曲线对照与处理记录和的问题
关于实验注意事项的问题
2.4 稳定 扫描速度调整为5s/div。加1mL任氏液，稳定10min以上。 试验开始前，如前负荷小于1g，再调至1g稳定。
特别提示： 实验中 换能器连线 张力不能变
装置不能触 碰，吸管、 移液器不能 接触插管等
2.5 实验观察
2.5.1 向插管中加入1ml任氏液，心搏曲线稳定后记录正常的心搏曲线 45s。加任氏液25l，稳定45s后。
1 材料 (Materials)
1.1实验动物（laboratory animal) 中华蟾蜍指名亚种蟾蜍（Zhuoshan Toad）10只，雌雄不拘，体重82.5 ± 10.2g
婚垫 雄蟾
雄蟾 雌蟾
1 材料 (Materials)
1.2 药品与试剂 肾上腺素（ adrenaline hydrochloride）,乙酰胆碱 （ acetylcholine chloride ），普萘洛尔（propranolol hydrochloride ）,阿托品（atropine sulfate ），氯化钾，氯化钙， 任氏液（Ringer’s solution）。
CaCl2 0.0011 mol/L CaCl2 0.0121mol/L
量效关系
非单调性
机制的复杂性
KCl 0.0050 mol/L
KCl 0.0069 mol/L
假说…….
实验验证……..
人员分工
心脏插管阶段： •1人主做心脏插管 •1人配合心脏插管 •1人撰写或修改实验流程
实验阶段： •1人指挥：第1步做什么，该怎么做；第二步.. •1人管记录：数据记录长度、打标…… •1人管处理：加药、冲洗、加灌流液
讲台讨论Biblioteka •请用实验验证细胞外低钙抑制心脏的收缩和舒张 •请用实验验证细胞外轻度高钾抑制心脏的收缩和舒张 •请用实验验证乙酰胆碱介导M受体抑制心脏的收缩和舒张 •请用实验验证肾上腺素激动β受体加强心脏的收缩和舒张 实验设计要求：实验方法、数据记录、结果分析、结论
关于人员分工合作问题
关于观察指标的问题
1 材料 (Materials)
1.3 仪器和装置 RM6240多道生理信号采集处理系统(成都仪器厂）， JZJ01张力换能器(成都仪器厂）。
RM6240多道生理信号采集处理系统
张力换能器
2 方法(Methods)
2.1 仪器连接和参数 张力换能器接RM6240多道生理信号采集处理系 统第1通道, RM6240多道生理信号采集处理系统采样频率： 800Hz，时间常数：直流，滤波：30Hz，灵敏度：7.5g。调零。
动物尸体送动物中心 8. 实验报告于2013-5-4 前提交。
离体蟾蜍心脏的实验研究
Experimental Research of Isolated Toad Heart
陆源 （luyuan@)
浙江大学医学院
Discussion
5组提问 3组提问 1组提问
6组提问 4组回答 2组回答
n control perfusion
EST（g ）
control perfusion
heart rate （bpm） control perfusion
Ca2+ -free Ringer’s solution
Ca2+ 22×10-4mol/L Ringer’s solution
K+5.9×10-3mol/L Ringer’s solution
注意事项：
1. 组内人员分工明确 2. 实验开始前，要熟悉实验的每个步骤及注意环节 3. 标本制备结束，应立即清洗器械、清理桌面 4. 实验记录过程中，要避免碰撞、振动实验台和灌流装置 5. 数据测量完毕，在本组计算机上的“数据lab5-00/heart perfusion.xls 文
件中输入数据并保存。 6. 先完成实验的，组织本组同学讨论实验结果，准备在全班讨论时发言。 7. 值日：督查各组善后工作；扫地、拖地，凳子放整齐；清洁洗涤台、将
EST
EDT
关于实验结果的问题
EST
EDT
关于人员分工合作问题
CaCl2 0.0011 mol/L Ca2+ -free Ringer’s solution
CaCl2 0.0011 mol/L
假说……
CaCl2 0.0022 mol/L
实验验证……
CaCl2 0.0011 mol/L CaCl2 0.0056 mol/L
EST EDT
EST
EDT
+dT/dtmax -dT/dtmax
t-dT/dtmax
Tabl 1 Effects of adrenaline,aceytlcholine, potassium and calcium ions on isolated toad heart
Groups
EDT（g）
2.5.5 用新鲜任氏液换洗数次，加入1ml任氏液，待曲线稳定后记录 45s ，在任氏液中加6×10-6 mol/L 的 acetylcholine （ACh）溶液 15l，心搏曲线稳定后记录45s 。再加2×10 –4 mol/L atropine （Atr）15 l，心搏曲线稳定后记录45s 。
2.5.6 用任氏液洗脱数次，曲线基本恢复后，加入1ml任氏液，待曲线 稳定45s后，在任氏液中加6×10-5 mol/L 的 adrenaline（Adr）溶 液10l，心搏曲线稳定后记录45s 。
2.5.7 用任氏液洗脱数次，收缩曲线基本恢复后，加入1ml任氏液， 待曲线稳定45s后，在任氏液中加5×10-4 mol/L propranolol （Pro）溶液10l，心搏曲线稳定后记录45s ，再加入6×10-5 mol/L 的 Adr 溶液10l，心搏曲线稳定后记录45s 。
本堂课安排： （8学时，360min）
1.离体蟾蜍心脏的实验研究（7学时） • 讨论（30min） •离体心脏灌流实验方法和要求讲解（心脏插管视频）（30min） •同学们实验和数据统计（180min） •讨论（20min） 2.高仿实验：家兔循环与泌尿系统综合实验（1学时） •实验方法和要求讲解（5min）、学生实验（40min） •实验结果讨论 •实验报告讲评
（“实验\生理科学实验\离体心脏灌流”菜单进入）
2.2 离体蟾蜍心脏标本制备 蟾蜍毁脑脊髓，蟾蜍仰卧于蛙板，打开 蟾蜍胸腔，暴露心脏，结扎下腔静脉，靠头端结扎左主动脉， 在左、右主动脉下穿线，在左主动脉根部剪一斜口，将插管插 入动脉圆锥， 在心室收缩时将插管插入心室，结扎固定，游离 心脏。
2.3 心脏与换能器连接 将蛙心插管固定在夹具上，用与张力换能器连 接是蛙心夹在心室舒张期夹住心尖，调节微调使心脏舒张末期张力 至1g。
2.6 数据测量与统计分析 2.6.1 数据测量 测量各项处理前后的心率（heart rate，HR)、心脏舒张
末张力（end diastolic tension，EDT) 、心脏收缩末期张力(end systolic tension，EST)。 2.6 .2 统计方法 结果以x s 表示，统计学分析采用Student t test方法。
4. 讨论 (discussion) 对实验结果逐一进行分析讨论，简明机理 结论 对实验中出现的异常情况进行分析 对实验改进意见和建议
5. 参考文献(references)
[1] 苏静怡.心脏：从基础到临床.北京：北京医科大学、中国协和医科大学 联合出版社，1999.4
[2] 陈主初.病理生理学.北京：人民卫生出版社，2001.8 [3] 姚泰.生理学.北京：人民卫生出版社，2002.4