细胞厂
• 用于大规模细胞培养与生产
细胞工厂
关键技术： 贴壁处理：高真空等离子接枝表面处理（ know-how: 接枝材料与接枝技术） 材料性能：生物相容性（无细胞毒性） 多层焊接技术：密封性与牢固性 灭菌技术：Y射线辐照
细胞工厂品牌
• 国外：美国Nunc; 美国Corning • 国产：北京DHS（引进国外技术）
细胞工厂的实验室应用：替代培养瓶及 多层培养瓶
细胞培养的评价
• • • • 贴壁率 细胞生长密度 细胞形态 毒力测定
生物制药
• 交流：zhonglm@
贴附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞：唯有贴附于固相表面 才能生存的细胞
细胞培养常用的培养瓶、 培养皿、6孔板、96孔板
贴附生长型细胞
细胞贴附材料与表面
贴附的固相表面材料：玻璃、塑料（聚苯乙烯） 玻璃：本身具有亲水性，适于细胞贴壁
塑料：没有亲水性，不能使细胞贴壁，所以必须在 塑料表面进行亲水性接枝（等离子处理）
大规模细胞培养
1.细胞培养反应器 2.转瓶培养 3.细胞工厂
转瓶培养的缺点
• 转瓶技术为传统的贴壁细胞培养技术，细胞接种 在旋转的圆筒形培养器-转瓶中，培养过程中转瓶 不断旋转，使细胞交替接触培养液和空气。 • 缺点：劳动强度大，占地空间大，单位体积提供 细胞生长的表面积小，细胞生长密度低，瓶间差 异较难控制等，因而难以产业化或规模化生产。 • 重要的是：转瓶由于不是静止培养，产品质量经 常达不到要求或由于细胞易破碎而存在DNA毒性 潜在危险，据称国家准备淘汰转瓶生产技术。
（二）悬浮型：
见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。 胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易 大量繁殖。 概念：培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 或以机械方法使保持悬浮状态下生长 来源：自血，脾或骨髓，血中白细胞癌肿细胞 特点：在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团 优点：生存空间大，提供数量大，传代方便(不需消化)， 易于收获，可获得稳定状态 缺点：纯化不方便，不能通过离心将死、活细胞分离
Corning CellSTACK Chamber
三种细胞工厂的比较
• 材料：均为PS塑料 • 表面处理：各自的Know-how • 顶层：DHS同Nunc, 便于显微镜观察细胞 生长情况 • 焊接工艺：Nunc采用超声焊接，Corning采 用特殊胶粘接，Corning的更加牢固（不易 开裂），DHS采用粘接工艺 • DHS可以定制任意层的细胞工厂
悬浮生长型细胞
悬浮培养磁力搅拌器
常用生产用细胞
• BHK-21细胞、C127细胞、CHO-K1细胞 、COS细胞、MDCK细胞、MRC-5细胞 、Namalwa细胞、sf-9细胞、Vero细胞、 WI-38细胞、鼠骨髓瘤细胞、SP2/0-Ag14 细胞
细胞库的建立
• 按我国和美国FDA的规定，用于生产的工 程细胞必需建立两个细胞库：原始细胞库 （master cell bank，MCB）和生产用细胞 库（manufacturer's working cell bank， MWCB）或称工作细胞库（working cell bank，WCB）
内容
• 一）什么是细胞工厂 • 二）细胞工厂的应用 • 三）几种细胞工厂的比较
细胞工厂的概念
• 实验室细胞培养：培养瓶、培养皿等 • 实验室较大量培养：多层培养瓶、1-5层细 胞工厂 • 大规模细胞培养：反应器、转瓶、细胞工 厂
我们熟知的细胞培养——动物细胞培养
动物细胞培养技术
1）无菌环境：超净台、安全柜 2）生长环境：CO2培养箱 3）营养环境：培养基 4）贴壁环境：培养瓶（皿）等、细胞工厂
DHS 细胞工厂
• 国内第一家引进国外技术生产的细胞工厂

Nunc Cell Factory
Corning CellSTACK Chamber
Choice of traditional surface treatment(TC), new Corning® CellBIND® Surface for enhanced cell attachment, or UltraLow Attachment Surface for reduced cell attachment
（一）贴附型：
大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞
贴附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本 存在方式 结果: 基于贴附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组 织，有机体的绝大多数细胞必须贴附于一固相表面才能生 存和生长。 培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要贴附 于某一固相表面才能生存和生长，因而属于贴附型细胞
动物细胞的形态
• 贴壁细胞：细胞的生长必须有可以贴附的支持物表面，依 靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上 生长、增殖，当细胞在该表面生长后，一般形成两种形态
，即成纤维样细胞型或上皮样细胞型
• 悬浮细胞：悬浮状态生长，如淋巴细胞、Namalwa细胞 • 兼性贴壁细胞：中国仓鼠卵巢细胞、小鼠L929细胞