第三节 衣原体
衣原体（chlamydia）是一类
严格寄生在细胞内,有独特发育周期, 能通过细菌滤器的原核细胞型微生物。 引起人类疾病的主要有沙眼衣原体、 肺炎衣原体和鹦鹉热衣原体。 我国学者汤飞凡（1897~1958）于1955年采用 鸡胚卵黄囊接种法在世界上首次分离培养出沙眼衣 原体。
衣原体
衣原体共同特征
1.标本 7-10天内取血,2周后取尿或抽取脑脊 液。 2.镜检→暗视野,镀银染色。 3.分离培养 Korthof培养基,28-30℃孵育2-4周, 如有生长培养液透明或云雾状混浊。
4.血清学检查 （1）显微镜凝集试验（MAT） 暗视野显微镜观察,若待检血清中有 相应抗体存在,则在相应抗原孔中见到钩 体凝集成团,呈小蜘蛛样。 MAT效价>1:300或双份血清效价增高4 倍以上增长有意义。
3.致病性 起病急,高热,乏力,全身酸痛,结膜充 血,腓肠肌压痛,淋巴结肿大。 症状：寒热、酸痛、一身乏; 体征：眼红、腿疼、淋巴大。 损伤肝、肾、肺、心及中枢神经;出现 休克,DIC,黄疸,脑膜炎等。
钩体病人
4.临床类型 (1)流感伤寒型 (2)黄疽出血型 (3)肺出血型 (4)脑膜炎型 (5)肾衰竭型 (6)胃肠炎型等 5.免疫性 体液免疫为主,病后获得对同型钩体的 持久免疫力。
（2）密螺旋体抗原试验 采用梅毒螺旋体或重组蛋白作为抗原, 测定病人血清中特异性抗体。 常用方法: a.荧光螺旋体抗体吸收试验 b.梅毒螺旋体抗体微量血凝试验 c.梅毒螺旋体制动试验 d.梅毒螺旋体荧光抗体双染色试验等。
(三) 临床意义
病人是唯一的传染源,经性接触传 播引起后天梅毒,经垂直传播可引起先 天梅毒。 1.先天性梅毒 亦称胎传梅毒,易致流产,早产或死 胎,也可致先天畸形,出生后被称为梅毒 儿,常呈锯齿形牙,间质性角膜炎,神经 性耳聋等症状。
(二) 微生物学检验
1.标本采集 一般可取病人痰、咽拭子、鼻咽洗液、 支气管分泌物、血清标本等。 2.直接检查 (1)标本涂片：电子显微镜观察无细胞 壁,易与细菌鉴别。 (2)核酸检测：PCR法快速、敏感和特 异。以特异性引物通过这一技术从患者痰 中检测肺炎支原体DNA。
3.分离培养 以20％小牛血清及新鲜酵母浸液制 成的液体或固体培养基。 阳性率不高,但对流行病学调查有重 要意义。 4.生化反应 能发酵葡萄糖产酸,不能利用精氨酸 与尿素,可还原美蓝。
梅毒儿
间质性角膜炎
马鞍鼻
2.后天性梅毒（获得性梅毒） 分为三期,表现反复,潜伏和再发现
象。
(1)一期梅毒 约在感染后3W左右在外生殖器部位 出现无痛性硬性下疳,其溃疡渗出物中含 大量梅毒螺旋体,传染性极强。
一期梅毒
约1个月,下疳常自然愈合,进入血液 中的TP则潜伏体内; 经2-3个M无症状的潜伏期后进入第二 期。 (2)二期梅毒 感染性强,全身皮肤黏膜出现梅毒疹, 周身淋巴结肿大,不经治疗一般在1-3个M 后症状自然消退而痊愈。
第十五章
螺旋体、支原体 衣原体、立克次体
微生物学检验与免疫学检验教研室 陈森洲
第一节 螺旋体
◆螺旋体（spirochete）一类细长、
柔软、弯曲、运动活泼,革兰染色阴性的
原核细胞型微生物。
螺旋体具有细胞壁,以二分裂方式繁
殖,原始核质,对抗生素敏感等,故分类学
归属细菌范畴。
根据螺旋的数目、大小、规则
1.含有DNA和RNA两类核酸,有核糖体； 2.具有细胞壁,其组成与G-菌相似； 3.缺乏供代谢所需的能量来源,必须依 赖宿主细胞提供； 4.二分裂方式繁殖； 5.具有严格的细胞内寄生性,有独特的 发育周期； 6.对多种抗生素敏感。
(一)生物学特性
◆1.形态、染色和发育周期
圆形或椭圆形,Giemas染色呈紫红色, 光镜下可见两种形态 (1)原体:小而致密,位于胞外,有核 质及细胞壁,为成熟典型衣原体,有感染 性,无繁殖力。 (2)始体（网状体）:大而疏松,位于 胞内,无核质及细胞壁,为细胞繁殖型, 无感染性。
程度等分2个科、7个属,其中引起人 类疾病的3个属。 1.疏螺旋体属（Borrelia） 2.密螺旋体属(Treponema) 3.钩端螺旋体属(Leptospira)
疏螺旋体
密螺旋体
钩端螺旋体
致病性螺旋体特点
特性 钩端螺旋体 密螺旋体 疏螺旋体 数10个更细密 8-14个细密而 3-10个稀疏不 规则螺旋,两 规则螺旋,两 规则螺旋,呈 端呈钩状 端尖直 波浪状 鼠类、猪 人 人、啮齿类动 物 钩端螺旋体病 梅毒、雅司病 回归热、莱姆 等 病等
支原体
1.与细菌不同 能通过滤菌器,缺乏细胞壁,生长需要胆 固醇,对抗生素不敏感。 2.与病毒不同 具有DNA和RNA,能在无生命培养基中生 长繁殖等特性。 3.致病性支原体 肺炎支原体、人型支原体、生殖道支原 体、解脲脲原体和穿透支原体等。
（一）生物学特性
1.形态与染色 ◆大小一般在0.2-0.3μm,无细胞壁,呈高度 多形性,常呈球形、杆形、长丝形及分枝状等。 G-性,常用Giemsa染色法染成淡紫色。
酶免 疫检 测 核 酸 杂 交
核酸 检测
细胞 培养
鸡胚 培养
直接检查 P C R MIF CF ELISA
1.直接涂片镜检 取结膜刮片,Giemsa或荧光抗体染色 镜检,观察上皮细胞内有无包涵体。 2.分离培养 取感染组织渗出液或刮取物,接种鸡 胚卵黄囊或细胞,再用IFA或ELISA检测培 养物中的衣原体。
原体(Giemsa染色)
始体(Giemsa染色)
原体与始体的性状比较
性状
大小（m）
细胞壁 代谢活性 胞外稳定性 感染性
原体
0.2-0.4
+ — + +
始体
0.5-1.0
— ++ — —
繁殖力
毒性
—
+
+
—
发育周期
0h
72 h
8h
48h 包涵体
始体
12 h
原体
36 h
包涵体
原体逐渐增大成为始体。始体无感染性,但能在空泡 中以二分裂方式反复繁殖,形成大量新的原体,积聚于细胞 质内成为各种形状的包涵体。
支原体与细菌L型比较
(三) 临床意义
支原体可选择性地与宿主细胞上相 应受体粘附,从细胞膜获取脂质与胆固醇, 损伤细胞引起疾病。 1.人类原发性非典型肺炎 ◆肺炎支原体主要经呼吸道飞沫传播, 引起此病 (病变间质性),症状一般较轻, 多见于5－15岁青少年。
2.非淋菌性和非衣原体性泌尿生殖 道感染 人型支原体、生殖道支原体和解脲 脲原体通过性接触传播。 如尿道炎、睾丸附睾炎、慢性前列 腺炎、阴道炎、宫颈炎、盆腔炎、输卵 管炎等,也可导致尿路结石,还可引起不 孕症的发生。
液体—云雾状生长 固体—菌落扁平透明
3.抗原构造 全球已发现25个血清群,273个血清 型。我国致病性钩端螺旋体有18个血 清群,75个(161)血清型。 4.抵抗力 60℃1min死亡,0.2%来苏,1:2000升 汞,1%石炭酸10-30min被杀灭；对青霉素 敏感；在湿土或水中可存活数月。
（二）微生物学检验
5.血清学鉴定
(1)生长抑制试验（GIT） 吸有型特异性抗血清的滤纸片置于接 种有支原体的固体培养基上,经孵育出现同 型血清抑制该型支原体生长现象。 (2)代谢抑制试验（MIT） 支原体接种在含有抗血清培养基中,若 抗体与支原体型一致,则抑制该支原体不能 分解葡萄糖产酸。
生长抑制试验
抗血清纸片 抑菌圈
性病淋巴肉芽肿
主要致病衣原体所致疾病
衣原体 沙眼衣原体 肺炎衣原体 鹦鹉热衣原体 兽类衣原体
人类疾病
沙眼
肺炎
肺炎
呼吸道感染
性病
幼儿肺炎 对磺胺敏感 +
呼吸道感染
呼吸道感染
—
—
—
自然宿主
人、小鼠
人
鸟类
低等哺乳动物
牛、羊
血清型
18
1
不明
3
第四节 立克次体
立克次体（Rickettsia）是一类严格 活细胞内寄生、以节肢动物为传播媒介、 G-的原核细胞型微生物。 对人致病的立克次体有五个属,即立 克次体属、柯克斯体属、东方体属、埃立 克体属、巴通体属。
沙眼衣原体包涵体
3.泌尿生殖道感染 男性为非淋菌性尿道炎, 可合并附睾 炎、前列腺炎等； 女性为尿道炎、宫颈炎、输卵管炎与 盆腔炎等。
衣原体宫颈炎
4.婴幼儿肺炎 5.性病淋巴肉芽肿 男性引起化脓性淋巴结炎和慢性淋巴 肉芽肿,常形成瘘管； 侵犯女性会阴、肛门、直肠,引起会阴 -肛门-直肠组织狭窄。
支原体 (电镜)
球形
长丝形
2.培养特性 ◆以二分裂法繁殖。在含有20%血清、酵 母浸膏和胆固醇的培养基中缓慢生长,在1.4% 琼脂固体培养基上2-4d后可形成“油煎蛋” 样菌落 。
肺炎支原体（电镜）
支原体
解脲脲原体（溶脲脲原体）
生殖道支原体
3.生化反应 可根据是否利用葡萄糖、水解精氨 酸和尿素来进行鉴别。 4.抵抗力 对理化因素敏感,对消毒剂敏感， 对干扰蛋白质合成的抗生素敏感（如强 力霉素）。
荧光抗体染色镜检
3.核酸检测 ELISA检测沙眼衣原体LPS和MOMP PCR和LCR（链接酶链反应）等扩增 技术检测沙眼衣原体DNA
(三) 临床意义
1.沙眼 通过眼-手-眼途径直接或间接密切 接触传播。
沙眼
早期流泪,后期结膜瘢痕、睑内翻、倒睫及 角膜血管翳引起角膜损害,影响视力或致盲。
2.包涵体结膜炎 包括婴儿及成人两类,婴儿通过产道感染, 引起滤泡性结膜炎,不侵犯角膜,能自愈。
（二）微生物学检查
1.标本采集 ◆一、二期梅毒:硬下疳渗出液; 梅毒疹渗出液或局部淋巴结抽出液。 2.显微镜检查 a.暗视野镜下观察螺旋体的动力和形 态； b.Fontana镀银染色法观察螺旋体的 形态。