常见致病菌的检测摘要:近年来食品药品安全的问题屡见不鲜,做好致病菌的检测,是防范于未然的措施,因而显得尤为的重要,也越来越受到人们的重视。
这就要求我们对一些常见的致病菌检测技术的要有一定的了解。
关键词:致病菌,肠球菌,霉菌和酵母菌,金黄色葡萄球菌,沙门氏菌。
一.肠球菌(1)、形态与染色【1】肠球菌为革兰阳性(G+)球菌,广泛分布于自然环境及人和动物消化道内。
20世纪80年代以来,肠球菌严重感染的发生率和病死率明显升高,并且由于肠球菌的固有耐药和获得性耐药,使许多常用抗菌药物在治疗肠球菌感染时失败。
因此,从分子水平对肠球菌致病因子、肠球菌引起的感染机制与治疗的研究显得尤为重要。
肠球菌为圆形或椭圆形、呈链状排列的革兰阳性球菌,无芽胞,无鞭毛,为需氧或兼性厌氧菌。
本菌对营养要求较高,在含有血清的培养基上生长良好。
(3)致病性【1】一般而言,肠球菌的毒力不高。
与金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌相比,肠球菌对大多数动物的半数致死量(LD50)值相当高,而且肠球菌很少引起蜂窝织炎和呼吸道感染。
肠球菌只有在宿主组织寄殖,耐机体非特异及免疫防御机制,并引起病理改变,才能导致感染。
粘附测定显示肠球菌可通过细菌表面表达的为粘附素,吸附至肠道、尿路上皮细胞及心脏细胞。
这些粘附素的表达亦受细菌生长环境的影响。
另外,肠球菌可产生一种聚合物质(系一种蛋白表面物质,可聚集供体与受体菌,以利质粒转移),在体外增强其对肾小管上皮细胞的粘附。
细菌生长环境亦影响肠球菌与多形核白细胞反应。
血清中生长的肠球菌与多形核白细胞反应较弱,而肉汤中生长的细菌反应较强。
体外多形核白细胞对肠球菌的有效杀灭作用需血清补体蛋白参与,而抗肠球菌抗体可增强该作用。
(4)、肠球菌属主要检测步骤如下:【2】方法一:肠球菌平板计数法检验程序25g (mL) + 225 mL 缓冲蛋白胨水↓10 倍梯度稀释↓选择2 个~3 个适宜连续稀释度,各取1 mL 分别加入灭菌培养皿↙↘KF琼脂36℃士1℃ 48h 士2h肠球菌琼脂35℃士2℃ 24h士2h↘↙确证实验↓肠球菌阳性↓菌落计数及计算↓报告结果方法二:肠球菌最近似值(MPN )测定法检验程序25g(mL ) + 225 mL 缓冲蛋白胨水↓10 倍梯度稀释↓选择3 个适宜连续稀释度,各取1 ml 分别加入肉汤中↙↘叠氮化钠葡萄糖肉汤管肠球菌肉汤管37℃士1℃ ,24h~48h 35C 士2 ℃ 24h 士2h↓↓↓↓无混浊混浊变黑不变黑↓↓↓↓肠球菌阴性确证实验确证实验肠球菌阴性↓↓肠球菌阳性肠球菌阳性↘↙MPN 值法报告肠球菌数/g(mI)二.霉菌和酵母菌(1)、形态【1】酵母菌是单细胞真核微生物。
酵母菌细胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。
比细菌的单细胞个体要大得多,一般为1-5微米×5-30微米。
酵母菌无鞭毛,不能游动。
其具有典型的真核细胞结构,有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、液泡、线粒体等,有的还具有微体。
霉菌是丝状真菌的俗称,意即“发霉的真菌”,它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体,但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。
在潮湿温暖的地方,很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落,那就是霉菌。
霉菌的菌丝。
构成霉菌营养体的基本单位是菌丝。
菌丝是一种管状的细丝,把它放在显微镜下观察,很像一根透明胶管,它的直径一般为3-10微米,比细菌和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。
菌丝可伸长并产生分枝,许多分枝的菌丝相互交织在一起,就叫菌丝体。
根据菌丝中是否存在隔膜,可把霉菌菌丝分成两种类型:无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。
(2)霉菌和酵母菌主要检测步骤如下【3】检样↓21ml样品+225ml无菌蒸馏水,均质↓10倍系列稀释↓选择2 个~3 个适宜连续稀释度,各取1 mL 分别加入灭菌培养皿↓每皿中加入15~20mlm马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基↓28℃士1℃ 5d菌落计数及计算↓报告结果三.金黄色葡萄球菌(1).生物学特性【4】典型的金黄色葡萄球菌为球型,直径0.8μm左右,显微镜下排列成葡萄串状。
金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛,大多数无荚膜,革兰氏染色阳性。
金黄色葡萄球菌营养要求不高,在普通培养基上生长良好,需氧或兼性厌氧,最适生长温度37°C,最适生长pH 7.4。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起,直径1-2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性,可在10-15%NaCl肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖,产酸不产气。
甲基红反应阳性,VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸,水解尿素,还原硝酸盐,液化明胶。
金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力,对磺胺类药物敏感性低,但对青霉素、红霉素等高度敏感。
(2)致病性【2】a.溶血毒素:外毒素,分α、β、γ、δ四种,能损伤血小板,破坏溶酶体,引起肌体局部缺血和坏死;b.杀白细胞素:可破坏人的白细胞和巨噬细胞;c.血浆凝固酶:当金黄色葡萄球菌侵入人体时,该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固,阻碍吞噬细胞的吞噬作用。
葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关;d.脱氧核糖核酸酶:金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温,可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌;e.肠毒素:金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素,分为A、B、C、D、E及F五种血清型。
(3).金黄色葡萄球菌主要检测步骤如下【5】25g(mL ) + 225 mL 生理盐水或磷酸盐缓冲液↓10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤↓37℃士1℃ 18h~24hBaird-Parker平板,血平板↓37℃士1℃血平板18h~24h,Baird-Parker平板或15h~48h↓↓↓涂片染色观察溶血 BHI肉汤和营养琼脂小斜面↓血浆凝固酶试验↓报告四.沙门氏菌检验(1).生物学特性【6】沙门氏菌属(Salmonella)是肠杆菌科的一个大属,有2000多个血清型,我国发现的约有100个。
沙门氏菌广泛存在于猪、牛、羊、家禽、鸟类、鼠类等多种动物的肠道和内脏中。
1880年Eberth首先发现伤寒杆菌,1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌,由于Salmon发现本属细菌的时间较早,在研究中的贡献较大,遂定名为沙门氏菌属Salmonella。
(2).沙门氏菌的致病性本属细菌绝大多数成员对人和动物有致病性,能引起人和动物的败血症与胃肠炎,甚至流产,并能引起人类食物中毒,是人类细菌性食物中毒的最主要病原菌之一。
【2】沙门氏菌经口进入人体以后,在肠道内大量繁殖,经淋巴系统进入血液,造成一过性菌血症,即感染过程。
随后,沙门氏菌在肠道和血液中受到机体的抵抗而被裂解、破坏,释放大量内毒素,使人体中毒,出现中毒症状。
(3). 沙门氏菌主要检测步骤如下【7】检样↓25 g(mL)样品+225 mLBPW36 ℃±1 ℃,8 h~18 h ↓↓↓1 mL+TTB 10 mL 1 mL+SC 10 mL↓↓↓42 ℃±1 ℃,18 h~24 h36 ℃±1 ℃,18 h~24 h↓↓BS XLD(或HE、显色培养基)↓↓36 ℃±1 ℃,40 h~48 h36 ℃±1 ℃,18 h~24 h↓挑取可疑菌落↓TSI,赖氨酸,NA,靛基质,尿素 (pH 7.2),KCN↓↓↓↓↓生化鉴定试剂盒或全 H2S+ 靛基质- H2S+ 靛基质+ H2S-靛基质-尿反应结果与左自动微生物生鉴定尿素-KCN- 尿素- KC 素-KCN- 侧描述不符系统赖氨酸 + 赖氨酸 + 赖氨酸 +↓↓↓↓↓甘露醇+、山梨醇+ ONPG-↓↓↓↓↓沙门氏菌,血清学试验非沙门氏菌↓报告五.常见致病菌的检测的意义随着生活水平的提高,食品药品安全的概念在国人的意识中也有了一定的变化。
过去的食品药品安全,主要集中表现为食品与药品量的安全,就是吃饱能治病的问题,所以有“深挖洞,广积粮”的说法。
而现代社会基本上已经解决了温饱问题,国人对食品与药品安全的理解,更多地关注食品与药品“质”的安全。
这是一个大的飞跃。
而食源性致病菌的危害是食品与药品安全的一个重要方面,在食品卫生控制中有重要的意义。
因此提前做好致病菌的检测具有非常大的意义。
六.参考文献【1】百度百科。
【2】食品伙伴网。
【3】GB 4789.28-2010 食品卫生微生物学霉菌和酵母菌的检验。
【4】百度文库。
【5】GB 4789.10-2010 食品卫生微生物学金黄色葡萄球菌的检验。
【6】百度知道。
【7】NY/T 550-2002 动物和动物产品沙门氏菌检测方法。