巴氏染色的几点体会
李瑞祥熊灏靳敏
巴氏（Papanicolaou）染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。

其适用于上皮细胞及间皮组织的标本。

是阴道脱落细胞检查中最常用的染色方法。

该染色法不但具有显示细胞核结构清晰，分色明显，透明度好，胞浆受色鲜艳等特点，而且所染标本不易脱色，可长久保存。

对如何染好巴氏染色，笔者有以下几点体会，报告如下。

1 EA 36 染液pH值的测试
EA 36 染液的酸碱度对巴氏染色的成功起着关键性作用，EA 36 染液由伊红、亮绿、桔黄及俾麦棕等染料配成。

伊红、亮绿、桔黄及俾麦棕等属于酸性染料。

在溶媒中其发色团是负离子部分。

发色团可与蛋白质中带正电的氨基结合，从而使胞浆显蓝色、绿色、桔黄色或红色。

但蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的pH值而改变的。

在偏碱环境中，蛋白质的羧基游离增多（带负电）。

在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电）。

所以必须把染液pH 值调至5.2为宜［1］。

EA 36 染液pH的调节，可用石蕊试纸法，也可用酸度计测试。

当然用酸度计法最为准确。

但以上方法均比较麻烦，同时还要受到仪器设备的限制，不方便。

本文采用一种简单方便的方法。

即用10%磷钨酸及饱和碳酸锂溶液直接测试。

具体做法是，拿一张滤纸先滴少量染液于纸上，若滴染液处呈紫色，说明染液偏碱，则滴加少量10%磷钨酸。

若显绿色，说明染液偏酸，则滴加少量饱和碳酸锂。

并充分混匀。

直至染液滴在纸上既显绿色又有红色，颜色鲜艳为宜。

用此法测试染液pH同用石蕊试纸法测试一样，同样可获得满意的染色效果。

磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力。

同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱，实际上是一对缓冲剂。

可中和分色及蓝化时可能留下的少量酸或碱。

保证染色达到理想效果。

2 分色
分色或酸化，对染色效果也很重要。

分色目的是去掉胞浆中染上的多余的苏木素，使胞核着色显示特异性。

因此，经分色后的胞浆在镜下观察应无色为佳。

若胞浆中还残留有苏木素染料，会影响EA 36 染液的着色。

结果会出现该红的胞浆不红，该绿的胞浆不绿，或不红不绿的现象。

看不到红蓝相间现象。

因此，掌握好分色是关键。

分色时间不能过短或过长。

太短胞浆中苏木素除不尽，太长会把核上的苏木素也退掉。

每次应在数秒内完成。

盐酸浓度应偏低（0.5%为好）。

这样便于掌握分色的时间。

3 蓝化或碱化
蓝化的目的是使胞核着色更具有特异性。

经蓝化后的胞核紫中带蓝。

这与红色的胞浆对比更鲜明。

蓝化所用的碳酸锂是一种弱碱。

因此，蓝化过程中碳酸锂还可中和分色时可能残留下的少量盐酸。

为EA 36 的着色创造良好条件。

所以蓝化时间可适当长些，以肉眼观察涂片变蓝为好［2］。

若涂片经EA 36 染色后，镜下观察效果不理想时。

根据涂片着色情况，可于EA 36 染液中滴加少量10%磷钨酸或饱和碳酸锂后重染EA 36 3～5min而补救。

比如:角化细胞浆不红，就滴加10%磷钨酸。

若角化前细胞浆也变红，就滴加饱和碳酸锂如此边复染边镜下观察，直至获得最佳染色效果为止。