【思考题】
一、简述双缩脲法测定蛋白质含量的原理 二、简述血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的原理 三、简述酶法测定血糖的原理 四、Km的意义？ 五、简述酶法测定血清总胆固醇的基本原理。
实验五 血清总胆固醇测定
浙江中医药大学
生命科学学院
生物化学教研室
【实验目的】 学习血清总胆固醇测定的实验原理。 掌握总胆固醇的测定方法和操作技术。
【实验原理】
血清脂类包括甘油三酯、胆固醇、胆固醇 酯、磷脂、糖脂、游离脂肪酸。它们在血液中 以脂蛋白（脂和载脂蛋白的复合体）的形式存 在。用超速离心技术可把血浆脂蛋白分成四大 族：CM、VLDL、LDL、HDL，用电泳技术可 把血浆脂蛋白分成α-脂蛋白、前β-脂蛋白、β脂蛋白、CM。
【试剂与器材】
1.总胆固醇测定试剂盒 2.酶标板、板条、微量进样器、微量移液器 3.生化培养箱、酶标仪 4. 血清
【操作步骤】
1. 2. 配制工作试剂： R1取4.5ml，R2取0.5ml，置于10ml玻璃试管中 取酶标板1块，板条12nm波长处在酶标仪上读 取各管的吸光度A。
【注意事项】
胆固醇: 胆固醇
标本采集：空腹12h采血，避免溶血。可用下列抗凝 剂，直至所列浓度对结果没有明显影响，EDTA 25mg/ml； 枸橼酸钠50mg/ml；草酸盐50mg/ml；肝素2mg/ml；氟化 物10mg/ml。 标本保存：血清胆固醇在室温（25℃）或2-8℃冷藏 可稳定7天，在-20℃密集冷冻可稳定数月，血浆中胆固醇 稳定性同血清。
结果与计算
测定管吸光度平均值 ×标准物浓度
血清总胆固醇=
标准管吸光度平均值
【参考值 】：
胆固醇: 胆固醇 血清参考值：3～5．20mmo1/L； 危险阈值：5．20～6．20mmol/L； 高胆固醇血症：＞6．20mmo1/L。
【临床意义 】---了解
TC增高 常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如 家族性高胆固醇血症、家族性apoB缺陷症、多源性高胆 固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合 征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老 年性白内障和牛皮癣。 TC降低 常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲 状腺功能亢进、肝脏疾病、严重感染、营养不良、肠道吸 收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病， 如癌症晚期等。
血清中总胆固醇（TC）包括游离胆固醇 FC和胆固醇酯（CE）两部分。胆固醇酯可 被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪 酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化 作用下生成∆4-胆甾烯酮和过氧化氢，H2O2 在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物 过氧化物 酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌 类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正 比。