竭诚为您提供优质文档/双击可除过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：实验35过氧化氢酶的活性测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使h2o2发生累积。
h2o2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。
过氧化氢酶可以清除h2o2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。
因此，植物组织中h2o2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。
本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。
一、过氧化氢含量的测定【原理】h2o2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被h２so4溶解后，在415nm波长下比色测定。
在一定范围内，其颜色深浅与h2o2浓度呈线性关系。
【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。
【试剂】100μmol/Lh2o2丙酮试剂：取30%分析纯h2o257μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（w/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。
【方法】1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。
待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml 刻度，415nm波长下比色。
2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2~5g（视h2o2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。
(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。
沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。
(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。
3.结果计算：植物组织中h2o2含量(μmol/gFw)=式中c—标准曲线上查得样品中h2o2浓度（μmol）；Vt —样品提取液总体积（ml）；V1—测定时用样品提取液体积（ml）；Fw—植物组织鲜重（g）。
二、过氧化氢酶的活性测定——高锰酸钾滴定法【原理】过氧化氢酶（cAT）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
R(Fe+2)+h2o2==R(Fe+3+oh－)R(Fe+3oh－)2+h2o2==R(Fe+2)2+2h2o+o2据此，可根据h2o2的消耗量或o2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的h2o2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的h2o25h2o2+2Kmno4+4h2so45o2+2Khso4+8h2o+2mnso4即可求出消耗的h2o2的量。
【仪器和用具】研钵；三角瓶50ml×4；酸式滴定管（10ml）；恒温水浴；容量瓶25ml×1。
【试剂】10%h2so4；0.2mol/L磷酸缓冲液ph7.8；0.1mol/L高锰酸钾标准液：称取Kmno4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸溶液标定；0.1mol/Lh2o2：市售30%h2o2大约等于17.6mol/L，取30%h2o2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/Kmno4溶液（在酸性条件下）进行标定；0.1mol/L草酸：称取优级纯h2c2o4·2h2o12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。
【方法】1.酶液提取取小麦叶片2.5g加入ph7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
2.取50ml三角瓶4个（两个测定两个对照），测定瓶中加入酶液2.5ml，对照瓶中加入煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml0.1mol/Lh2o2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%h2so42.5ml。
3.用0.1mol/LKmnＯ4标准溶液滴定h2o2，至出现粉红色（在30min内不消失）为终点。
酶活性用每克鲜重样品1min内分解h2o2的毫克数表示：酶活(mgh2o2/gFw·min)=式中A—对照Kmno4滴定毫升数；b—酶反应后Kmno4滴定毫升数；VT—酶液总量（ml）；V1—反应所用酶液量（ml）;w —样品鲜重（g）；【注意】1.7—1ml0.1mol/L的Kmno4相当于1.7mgh2o2。
所用Kmno4溶液及h2o2溶液临用前要经过重新标定。
三、过氧化氢酶的活性测定——紫外吸收法【原理】h2o2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。
根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。
【仪器与用具】紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴；【试剂】0.2mol/Lph7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）；0.1mol/Lh2o2（用0.1mol/L高锰酸钾标定）。
【方法】1.酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g置研钵中，加入2～3ml4℃下预冷的ph7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。
混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上部澄清液在4000rpm下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液。
5℃下保存备用。
2.测定：取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表40-2顺序加入试剂。
表40-2紫外吸收法测定h样品液配置表25℃预热后,逐管加入0.3ml0.1mol/L的h2o2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。
以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。
过氧化氢酶活性(u/gFw/min)=式中A240=As0－As0—加入煮死酶液的对照管吸光值；As1,As2—样品管吸光值；Vt—粗酶提取液总体积（ml）；V1—测定用粗酶液体积（ml）；Fw—样品鲜重（g）；0.1—A240每下降0.1为1个酶活单位（u）；t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。
【注意事项】凡在240nm下有强吸收的物质对本实验有干扰。
【思考题】1.影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些?2.(:过氧化氢酶活力的测定实验报告)过氧化氢酶与哪些生化过程有关?篇二：过氧化氢酶活力的测定实验三过氧化氢酶活性的测定一、实验目的：了解过氧化氢酶的作用，掌握碘量法测定过氧化氢酶活性的原理和方法；二、实验原理:过氧化氢酶是一类色素蛋白，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢既是氧化剂又是还原剂。
R（Fe＋2）2＋h2o2---R(Fe+3oh)2R(Fe+3oh)2+h2o2----R（Fe＋2）2+2h2o+o2并合上式：h2o2----2h2o+o2据此，可根据消耗h2o2的消耗量或o2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量的过氧化氢溶液，经酶促反应后，加入过量的KI溶液生成的I2用标准的na2s2o3滴定，根据na2so3消耗的体积计算h2o2的消耗量。
三、实验材料、仪器和试剂：1、实验材料：小白菜2、仪器：恒温水浴锅、研钵、容量瓶、刻度吸管、100mL 三角瓶3、试剂：（1）0.05mol/Lh2o2（2）2mol/Lh2so4（3）0.1mol/Lna2s2o3（4）1%淀粉溶液（5）10%(nh4)6mo7o24（6）ph7.8的磷酸缓冲液（7）20%KI（8）caco3四、实验步骤：（1）酶液提取：称取2.5g白菜叶，加少量caco3，2mLph7.8的缓冲液少量，研成匀浆，移入100ml容量瓶，用上述缓冲液冲洗研钵数次转入容量瓶中定容，静置10分钟，过滤。
取滤液10mL 于另一100mL的容量瓶中稀释定容待测（根据酶活高低而定）。
（2）酶促反应：取锥形瓶4个，编好号各加入10ml酶液之后，立即向两个瓶中加入2mol/Lh2so45mL，终止酶活性，作空白对照。
向另外两瓶各加h2o25mL，摇匀，在加入h2o2的那一刻起，记录时间，5分钟后迅速向实验瓶中加入2mol/Lh2so45mL，终止酶活性。
向三角瓶中加1mL20%KI和3滴(nh4)6mo7o24，摇匀后迅速用标准na2s2o3溶液进行滴定至淡黄色，加入1mL1%淀粉指试剂，蓝色恰好消失，记录消耗的na2s2o3的体积V0，V；五、结果记录与数据处理：被分解的h2o2量（mg）=（空白滴定值-样品滴定值）×na2s2o3摩尔浓度×17过氧化氢酶活性（mg.g-1.min-1）=六、结果分析与问题讨论：被分解的h2o2量(mg)?(总体积?测定取液量)样品重(g)?时间(min)实验十还原型Vc含量测定一、实验目的学会从生物样品中提取维生素c方法,了解蔬菜中维生素c的含量。
学会测定维生素c含量的原理和方法,进一步掌握滴定法的基本操作技术.二、实验原理Vc由于其结构中具有烯二醇的结构，所以它是一种强还原剂，易被弱氧化剂氧化脱氢而成氧化型抗坏血酸。
Vc在酸性溶液中比中性溶液及碱性溶液中稳定，但易被热、光及某些金属离子破坏。
本实验是用碘液作氧化剂，淀粉为指示剂，当Vc全部被氧化后，过量一滴碘液与淀粉指示剂反应生成淡兰色络合物，即为终点。
三、实验材料、试剂及仪器材料：西红柿。
试剂：2％草酸溶液：称取20g草酸溶于蒸馏水中，溶解后稀释到1000mL，混匀；1％可溶性淀粉溶液：称取1g可溶性淀粉用少量蒸馏水调成匀浆，倾入80mL的沸水中继续煮沸至透明，冷却后稀释至100mL；0．1mol/L碘液（随用随配）：称取6.5克碘和20克碘。