实验八过氧化氢酶活力的测定
一、实验目的
掌握过氧化氢酶活力测定的原理和方法。

二、实验原理
过氧化氢酶（catalase,CAT,EC1.11.1.6）普遍存在于植物的各种组织中，其活力大小与植物的代谢强度和抗寒、抗病能力有一定的联系，故常需进行测定。

过氧化氢酶能把过氧化氢分解成水和氧，其活力大小以一定时间内一定量的酶所分解的过氧化氢量来表示。

被分解的过氧化氢量可用碘量法间接测定。

当酶促反应进行一定时间后，终止反应，然后以钼酸铵作催化剂，使未被分解的过氧化氢与碘化钾反应放出游离碘，再用硫代硫酸钠滴定碘。

其反应为：
过氧化氢酶
2H2O22H2O+O2
钼酸铵
H2O2+2KI+H2SO4I2+K2SO4+2H2O
I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6
反应完后，以样品溶液和空白溶液的滴定值之差求出被酶分解的过氧化氢量，即可计算出酶的活力。

三、仪器、试剂和材料
1．仪器：天平，研钵，容量瓶，恒温水浴，移液管，三角瓶，滴定管。

2．试剂：
（1）0.01mol/L的过氧化氢溶液；
（2）1.8mol/L的硫酸溶液；
（3）10%钼酸铵溶液；
（4）0.02mol/L硫代硫酸钠溶液；
（5）1%的淀粉溶液；
（6）20%的碘化钾溶液；
（7）碳酸钙粉末。

3、材料
油麦菜
四、操作步骤
1．酶液提取
称取新鲜油麦菜0.25g，剪碎置研钵中，加入0.1g碳酸钙和2mL水研磨成匀浆，用漏斗移入50mL的容量瓶，研钵用少量的水冲洗，冲洗液也一并移入容量瓶中，然后用水定容。

摇荡片刻，静置澄清后吸取20.0mL上清液至100ml容
量瓶中，加水定容，摇匀后备用。

2．酶促反应
取三个100mL三角瓶编号，向各瓶准确加入稀释后的酶液10.0ml，随即在3号瓶中加入1.8mol/L硫酸5.0ml以终止酶的活力，作为空白溶液。

各瓶均加入5.0mL0.01mol/L过氧化氢溶液，每加一瓶即摇匀并开始记时。

5min（必须准确）后立即向1、2号瓶各加5.0mL1.8mol/L硫酸溶液。

3．滴定
各瓶分别加入1.0mL20%的碘化钾溶液和3滴钼酸铵溶液，然后依次用0.02mol/L的硫代硫酸钠滴定，滴定至溶液淡黄色后加入5滴1%的淀粉溶液，再继续滴定至蓝色消失即到终点，记下各瓶消耗的硫代硫酸钠的体积。

五、结果处理与分析
1．按国际酶活力单位计算
被分解的过氧化氢量（μmol)=1/2×V Na2S2O3(空白滴定值-样品测定值）（mL)×10-3×0.02×106
被分解的过氧化氢量（μmol)×酶液稀释倍数过氧化氢酶活力（U)=---------------------------------------------------------------
时间（min）×样品重量（g）2．酶活力的习惯计算法
被分解的过氧化氢量（mg)=V Na2S2O3（空白滴定值-样品滴定值）（mL)×0.02×1／2×34.02
被分解的过氧化氢量（mg)x酶液稀释倍数过氧化氢酶活力=---------------------------------------------------------------
样品重量（g)x时间（min）
其中0.02为硫代硫酸钠的物质的量浓度，34.02是过氧化氢的摩尔质量。

【注意事项】
酶促反应时间必须严格控制。

【思考题】
查阅文献，说明测定过氧化氢酶活力的方法有哪些，原理各是什么？
【参考资料】
郭蔼光，郭泽坤.生物化学实验技术.北京：高等教育出版社，2007:77-79.。