特殊显微镜
特殊显微镜及其使用
实验目的：掌握暗视野显微镜、相差显微镜及荧光显微镜的原理、构造及其使用方法。

实验材料：水绵、轮藻、褐藻、洋葱内表皮、汤菜下表皮、原生动物；
Ⅰ暗视野显微镜
一、实验原理：利用暗视野聚光器使入射光束从聚光器斜向照明被检样品，使之发出反射和散射光。

镜检时，因不能直接观察到照明光线而背景是黑暗的，由样品发出的散射光和反射光形成了明亮的物体影象。

二、使用：
1、换装暗视野聚光器，安装到位并固紧；
2、调节暗视野聚光器焦点：转动聚光器升降螺旋，使视场中光环调成一最小的
圆形光点，即为聚光器的焦点；
3、制一简装片(洋葱内表皮，原生动物观察)进行观察。

Ⅱ相差显微镜
一、实验原理：利用相差装置将透过细胞标本不同区域（密度不同）的
光波的光程差变成振幅差，从而使细胞内的各种结构之间呈现出清晰可见的明暗差的特殊光镜。

二、实验方法：
1、相差显微镜的结构：
(1)、倒置显微镜：光源（灯室和视场光阑控制杆）
（2）、圆盘状环状光栏及环状光栏的调中螺杆：是能使透过聚光器的光线形成空心光锥并聚焦到标本上；
（3）、物镜：及位于物镜后焦面的环行相板（一种涂有相位膜和吸收膜的玻璃板）。

（4）、观察转盘及伯特兰透镜调焦杆
（5）、调焦旋钮及载物台移动钮
（6）、相差物镜：相差物镜的后焦面上有种类不同的相板。

因物镜内相板的不同，物镜在明暗反差上可区分为两大类：即明反差B（或
正反差P）和暗反差N（或负反差D），物镜的反差类别，用英
文字母B或N和D或P标志在物镜外壳上，并兼有高H、中M、
低L三种不同的反差。

有的相差物镜用字样Ph标示。

2、合轴调中：在视场中观察所见，环状光阑为一明亮的圆环，而相板的圆环为一暗环。

互相匹配的明环与暗环大小一致。

在使用时两者要合轴。

两环的重叠，须通过合轴调节方能取得。

光源和视场
转盘式环
物镜（环行相板） 观察转盘（左：
调焦旋钮及载物台移动
（1）将聚光镜转盘放到[PHL]位置，观察转盘放到[o]位置；
（2）将视场光阑全部打开；
（3）将4X物镜转入到光路上，并将标本调至焦点位置；
（4）将观察转盘转到[B]位置，转动伯特兰透镜调焦杆，使相位环调人到物镜的焦点上；
（5）用环状光栏的调中螺杆，使物镜的相位环（暗环）与环状光栏（亮环）相重合。

3、将观察转盘转回到[o]位置，即可进行观察。

注意：（1）、环状光栏与物镜配套使用；每改变一次放大倍数，则要转换一次环状光栏；
（2）、环状光栏一次完成调中以后，在使用另外的环状光栏时，一般不需要更多的调中；如果用于精确的观察和显微摄影时，就要保证在
改变放大倍数时，重新进行调节。

4、制一简装片（褐藻胞质环流，花粉），进行观察。

Ⅲ荧光显微镜
一、实验原理：利用一定波长的紫外线作为激发光源照射被检标本，使标
本中的荧光物质受激发后产生荧光的特殊光镜。

这一现象称为荧光现象。

二、实验方法
1、荧光显微镜的结构
紫外发
二向色镜光阀阻挡滤
2、反（落）射式荧光显微镜光路图
3、使用：水绵叶片自发荧光
（1）、样品聚焦：将样品置于载物台上，用光阀阻断短波光，普通光透射照明，低倍镜聚焦；
（2）、待寻找到最佳影象后，熄灭溴钨灯或将其转入最暗，推开光阀，使短波光进入；
（3）、观察。

注意：一定用光阀阻断短波光，切勿频繁开启汞灯开关，以免减短其使用寿命。

实验作业：
1、绘制暗视场和荧光显微镜被检样品形态图（各一样品）。

2、相差显微镜有那些特有的附件？其构造如何？。