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⑧ 打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽 中，盖上样品室盖
⑨ 将参比溶液推入或拉入光路中，按“100%T”调零A ⑩ 将被测溶液拉入光路中，此时，显示器上所显示是被测
样品的吸光度参数
实验完成后，关闭电源，洗净比色皿，并盖好盖布。
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（二）双缩脲法测定蛋白质
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1．原理 Beer-Lambert（比尔）定律：
T=I/I0 A=lg1/T=lgI0/I
A=KCL 其中：T为透光率；A为吸光率；I0为入射
光强度；I为透射光强度； K为吸收系数；C为溶液浓度；L为溶液光
程的厚度
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2．常用方法 （1）标准曲线法
▪ 标准曲线与样品的测定条件必须一致。
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（2）标准管法 CX/AX=CS/AS，已知CS，测定AS、AX，可 求得CX。
“0%T”键：用于自动调整零透射比 “波长设置”旋钮：用于设置分析波长
• 3.样品测试操作 ① 打开电源开关，使仪器预热20分钟 ② 用“波长设置”按钮将波长设置在您将要使用的分析波长位 置上
③ 打开样品室盖，将挡光体插入比色皿架，并将其推或拉 入光路
④ 盖好样品室盖，按“0%T”键调透射比零 ⑤ 取出挡光体，盖好样品室盖，按“100%T”调100%透射比 ⑥ 按“方式键”（MODE）将测试方式设置为吸光度方式(A) ⑦ 将参比溶液和被测溶液分别倒入比色皿中
H2N-CO-NH2 + NH2-CO-NH2
H2N-CO-NH-CO-NH2 ＋NH3
双缩脲
双缩脲反应：双缩脲在碱性条件下与铜离子结合 生成紫红色化合物，颜色深浅与蛋白质浓度成 正比。
本法测定蛋白质范围1-10mg
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三、操作步骤 1.取15支试管，按下表编号、加试剂
•2.各管混匀后，加入双缩脲试剂3.0mL,37oC反应30min。 •3.以0号管调零，测定各管540nm光吸收值。
（3）摩尔吸光系数法 C=A/（为L=1cm，C为1 mol/L时的
吸光系数，也称为摩尔吸光系数。
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四、分光光度计的使用
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1．722型分光光度计的外形
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2.仪器操作键介绍 “方式设定”键（MODE）：用于设置测试方 式
“100%T/0ABS”键：用于自动调整 100.0%T(100.0透射比)或0ABS(零吸光度 )
双缩脲法测蛋白质含量
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二、原理
一、分光光度法的基本原理及方法 （一）利用吸收光谱对物质进行定性分析
1．原理
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2．主要方法： （1）比较吸收光谱曲线 （2）比较最大吸收波长 蛋白质的最大吸收nm。
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（3）比较吸光度的比值
纯DNA
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（二）利用吸收光谱对物质进行定量分析