质的浓度。
➢ 在一定的浓度范围内，颜色的深浅与蛋白质含量呈线性关系。因此可用比色法测
定蛋白质浓度。
NH2 CO
NH2
CO
NH2 NH2 加热180oC?
NH +NH3
CO
CO
NH 2
NH 2
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紫红色铜双缩脲复合物分子结构
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显色剂与显色反应
➢ 在分光光度法中，许多不吸收光的无色物质可以用显色反应变成有色物质，使之能进行比 色测定，并能提高测定的灵敏度和选择性。在比色分析或分光光度分析中，将待测组分转 变成有色化合物的反应叫做显色反应，与待测组分反应生成有色化合物的试剂叫显色剂。
还有红外光（波长大于760-5000000nm）、紫外光（波长200-400nm）、X射线等。 ➢ 在可见光区，不同波长的光呈不同的颜色，但各种有色光之间并没有严格的界线，而
是由一种颜色逐渐过渡到另一种颜色。
溶液的颜色与吸收光颜色的关系
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Beer-Lambert定律－吸收光谱法基本定律
➢ 描述物质对单色光吸收强弱与厚度和待测物浓度的关系。 ➢ 含义：一束单色光通过溶液时，光能被吸收的程度与溶液的浓度和液层厚度成正比。
污染瓶中的标准液体。 ➢ 使用滴管时，滴管尖端朝下，避免试剂流入橡皮帽内。 ➢ 使用有毒试剂及强酸强碱时，尽可能用量筒取，若用吸管只能用吸耳球取，切勿
用嘴吸取，以免造成意外。
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吸量管的使用
➢ 正确拿法：中指和拇指拿住吸管上端，食指顶住吸量管顶端。 ➢ 取液：用吸耳球吸取液体至刻度上，眼睛看着液面上升；吸完后用食指顶住吸量管上
谢谢大家
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722分光光度计使用注意事项
➢ 样品室盖应轻开轻放； ➢ 比色皿拿其磨砂面，液体装入约3/4高度，并用擦镜纸擦净外壁，每次用完后自来水
冲洗干净，倒置于滤纸上； ➢ 倒取试剂时不能在仪器表面上方操作，仪器上请勿放任何物品； ➢ 每调换一次波长，都应将空白溶液的吸光度调至“0”。
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双缩脲法测定蛋白质含量
实验目的
了解和掌握双缩脲测定蛋白质浓度的原理和方法。
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实验原理
➢ 蛋白质在强碱性溶液中与稀硫酸铜溶液作用产生颜色反应，生成紫红色化合物，
称为双缩脲反应。
➢ 具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应，蛋白质在碱性溶液中，能
与Cu2+形成紫红色络合物，颜色深浅与蛋白质浓度成正比，故可以用来测定蛋白
A＝KCL 或 lgI0/I =KCL A为溶液对光的吸光度，反映了物质对光的吸收程度； C为溶液浓度； L为溶液厚度； I0为照射待测物质的单色光强度，I为透过待测物质光线的光强度，透光度 T= I/I0即溶液透过光的强度与入射光的强度之比； K为吸光系数，是物质在单位浓度和单位厚度的条件下对入射光的吸光度。 实验中溶液厚度不变，则A＝KC
相同，吸收系数不同。 ➢ 比较吸光度的比值：多用于检测物质的纯度（DNA A260/A280=1.8 纯度鉴定)
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物质的定量分析
➢ 标准曲线法 配制一系列不同浓度的标准溶液，用选定的显色剂显色。选用合适波长的入射光。测定 时先以空白溶液调节透光率100%，然后分别测定标准系列的吸光度。以吸光度为纵坐 标，浓度为横坐标作图得到一条通过原点的直线，叫做标准曲线（或称A-C曲线）。
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12、人乱于心，不宽余请。14:38:4914 :38:491 4:38Su nday , October 18, 2020
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13、生气是拿别人做错的事来惩罚自 己。20. 10.1820 .10.181 4:38:49 14:38:4 9Octob er 18, 2020
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14、抱最大的希望，作最大的努力。2 020年1 0月18 日星期 日下午2 时38分 49秒14 :38:492 0.10.18
生物化学与分子生物学实验
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实验记录
实验记录是在进行科学研究过程中积累资料、经验的一项重要工作，每一次实验过程 中都应当养成良好的习惯，及时做好记录和总结。 要求： ⑴ 真实性 ⑵ 原始性 ⑶ 完整性 ⑷ 条理性
实验报告的书写
实验结束后，应及时整理和总结实验结果，写出实验报告。完整的实验报告应包 括：实验题目、实验目的 、实验日期、操作步骤与条件、实验结果、讨论和结 论等项目。
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实验步骤
1.按下图表所示加入相应的试剂或样品
试剂
管号
01
2 34 5
6
牛血清标准蛋白溶液（ml） 2mg/ml
—ห้องสมุดไป่ตู้
0.6
1.2 1.8 2.4 3.0
0
待测蛋白液（ml）
— — — — — — 3.0
蒸馏水（ml）
3 2.4 1.8 1.2 0.6 0 0
蛋白质浓度（mg/ml）
0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 未知
➢ 严禁在实验室内吃饭、吸烟、扔废物和随地吐痰，实验室内学生轮流安排值日，实 验结束离开实验室之前，关好窗户，切断电源，水源，确保安全。
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试剂使用规则
➢ 使用试剂前应该仔细辨认标签，看清名称及浓度，是否为本实验所需。 ➢ 取出试剂后，立即将瓶塞盖好，放回原位；未用完的试剂决不可倒回原瓶。 ➢ 取标准溶液时，应该将标准溶液倒入干试管中，再用干净吸管吸取标准液，以免
➢ 在实际分析中，同一待测组分可与多种显色剂发生显色反应，生成不同的有色物质。为了 保证测定的灵敏度和准确度，在分析时常需对显色反应进行选择，选择原则如下： 1. 选择性好，干扰少或干扰易消除； 2. 灵敏度要高； 3. 生成有色化合物的组成恒定，化学性质稳定； 4. 生成的有色化合物与显色剂之间的颜色须有明显的差别，最大吸收波长之差大于60nm。
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光吸收示意图
I0
I
C
b
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吸收光谱和物质的定性分析
➢ 物质的吸收光谱与物质分子结构有关。 ➢ 吸收光谱曲线是物质的特征曲线。用各种不同波长的光线作为入射光测定物质的吸光度
（Absorbance），然后以波长（λ）为横轴，相应的吸光度（A）为纵轴，按结果作图， 可得到该物质的吸收光谱曲线，这种曲线体现了物质对不同波长的光的吸收能力。 ➢ 在一定的温度、pH值等条件下吸收光谱的曲线形状是一定的。在吸收光谱中，往往可 找到一个或几个吸收最大值，该处的波长称为最大吸收波长（λmax）。物质不同，它 们的最大吸收波长也往往不同。
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15、一个人炫耀什么，说明他内心缺 少什么 。。202 0年10 月下午2 时38分 20.10.1 814:38 Octobe r 18, 2020
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16、业余生活要有意义，不要越轨。2 020年1 0月18 日星期 日2时38 分49秒 14:38:4 918 October 2020
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17、一个人即使已登上顶峰，也仍要 自强不 息。下 午2时38 分49秒 下午2 时38分1 4:38:49 20.10.1 8
端。 ➢ 调刻度：吸量管与地面保持垂直，下口与试剂瓶接触，并成一角度；用食指控制液体
下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。 ➢ 放液：吸量管移入准备接受溶液的容器中，使其出口尖端接触器壁，并成一角度，吸
量管仍保持垂直。放开食指，使液体自动流出。吸量管应最后靠壁15秒。
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吸量管的使用注意事项
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722分光光度计使用方法
➢ 接通电源，打开仪器电源开关，打开样品室盖，预热10min; ➢ 将空白液或对照液及测定液分别装入比色杯3/4体积并用擦镜纸擦净外壁，放入样
品室内, 空白液一般放于最外格，样品比色杯放入位置与试管位置对应; ➢ 调好波长; ➢ 调节按钮
开盖时，调 T 参数 调为 100 合上盖，调 A 参数 调为 0; ➢ 逐步拉出样品室拉杆（听到“咔”一声），读取吸光度值(A）; ➢ 读数完打开样品室盖，再将读数写入记录本。
➢ 比色杯：用毕立即用自来水反复冲洗。洗不净时，用盐酸或适当溶剂冲洗，再用 自来水冲洗。避免用碱液或强氧化剂清洗，切忌用试管刷或粗糙布(纸)擦拭。
➢ 上述所有玻璃器材洗净(以倒置后器壁不挂水珠为干净的标准)后，根据需要晾干 或烘干。
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分光光度法
一般性实验-1
➢ 光是一种电磁波，通常用频率和波长来描述光。 ➢ 人的视觉所能感觉到的光称为可见光，波长范围在400～760nm，人的眼睛感觉不到的
➢ 吸量管上端标有“吹”字。将所量液体全部放出后，还需要吹出残留于管尖的溶 液。此类吸量管为“吹出式”，未标“吹”字的吸量管，则不必吹出管尖的残留 液体。(0.5ml以下的都要吹）
➢ 吸量管尖应接触受器内壁，但不应插入受器内的原有液体之中，以免污染吸量管 及试剂。
➢ 吸取血液、尿、组织样品、粘稠试剂或有颜色的吸量管，用后应及时用自来水冲 洗干净。如果吸取一般试剂的吸量管可不必马上冲洗，待实验完毕后，用自来水 冲洗干净，晾干备用。
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2. 各管混匀后加入双缩脲试剂3.0ml，充分混匀； 3. 37度水浴30min； 4. 在540nm 处以0号管调零点测定各管吸光度； 5. 绘制标准曲线：以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标； 6. 对照标准曲线，求待测蛋白质浓度。
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注意事项
➢ 读数时要注意读的是A的值； ➢ 注意正确标记试管（用记号笔清晰标记于试管2/3高处）； ➢ 准确记时。
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实验室规则
➢ 上实验课时不迟到，不早退，自觉遵守课堂纪律，上课时应保持实验室安静，不得大 声说笑。进入实验室必须穿实验工作服。
➢ 实验课前认真预习有关课程，明确实验目的、要求和注意事项，熟悉实验内容和方法 步骤。