脯氨酸的检测方法1. 原理样品用茚三酮处理，样品中的脯氨酸反应生成橙色物质，在520nm 检测吸光度，并作空白对照实验。
2. 应用范围本方法适用于蜂蜜、果汁和浓缩汁中的脯氨酸的检测。
本方法在其它方面的应用必须经过个别论证。
3. 试剂及仪器3.1 脯氨酸3.2 3%茚三酮2-甲氧基乙醇溶液（0.3g 茚三酮溶解于10ml 2-甲氧基乙醇，每天保持新鲜，即现用现配）3.3 2-甲氧基乙醇3.4 蚁酸（96%），即甲酸3.5 异丙醇（2- 丙醇）水溶液：水：丙醇= 1：13.6 15ml 旋盖玻璃离心管（确保离心管的边缘没有缺口，将有缺口的离心管丢掉）3.7 分光光度计，检测吸光度设定在520nm 下3.8 1cm 玻璃比色皿4. 样品准备4.1苹果，梨和大部分浆果的果汁用单一浓度（即原果汁浓度），橙汁用1：20 的水进行稀释。
其它的果汁应进行适当的稀释，以保证稀释后的样品中的脯氨酸的含量低于50mg/L（见稀释表）。
浓缩果汁用水稀释到单一浓度，然后再进一步进行适当的稀释。
蜂蜜的稀释，采用2.5g蜂蜜加50ml水。
将样品在分析之前离心5min 左右，去除悬浮物，取上清液进行分析。
4.2 原果汁稀释表稀释比例颜色空白期望值样品类型Apple 苹果1:1 yesApricot 杏21:1 yesAronia 野樱莓1:1 yesBanana 香蕉1:1 yesBlackberry 黑莓1:1 yesCherry 樱桃1:1 yesCranberry 蔓越莓1:1 yesGrape 葡萄16:1 yesGrapefruit 柚子21:1 noGuava 番石榴3:1 yesKiwi 泥猴桃1:1 yesLem on柠檬21:1 noLime酸橙21:1 noMandarin中国柑桔21:1 noMango芒果1:1 yesNectarine 油桃21:1 noOran ge柑桔21:1 noPapaya番木瓜1:1 yesPassion Fruit 西番连1:1 yesPeach 桃6:1 yesPin eapple 菠萝1:1 yesPlum李子7:1 yesPrune 西梅16:1 yesRaspberry悬钩子（树梅）5:1 yesStrawberry 草莓1:1 yesTan geri ne 橘子21:1 noTomato番茄1:1 yes5. 标准溶液的制备5.1脯氨酸贮备液（500mg/L） : 0.0500g脯氨酸加水定容至100ml。
此贮备溶液冷藏存放，每月重新配置一次。
5.2 50mlg/L准工作溶液：每天配置一次，取5ml脯氨酸贮备溶液，用水定容至50ml。
用该溶液作为分析用的标准溶液。
6. 结果判定6.1将离心管编号，并设计样品编号与离心管标号的对照表格。
按下表，向离心管内移取相应溶液：样品*颜色空白标准水空白茚三酮溶液 1.00 mL 1.00 mL 1.00 mL2-甲氧基乙醇 1.00 mL标准溶液0.50 mL样品0.50 mL 0.50 mL水0.50 mL蚁酸0.25 mL 0.25 mL 0.25 mL 0.25 mL6.2深颜色的果汁或者稀释度较低的果汁中的色素物质，将会对检测结果的判定产生影响。
为纠正因此产生的结果偏差，使用颜色空白对照实验。
对苹果汁、梨汁、浆果汁和蜂蜜采用颜色空白对照实验。
50mg/l标准溶液的水空白对照实验用于柑橘汁及其它高稀释倍数的果汁检测。
6.3盖紧离心管，充分摇匀（处理茚三酮时要戴乳胶手套）。
同时将所有离心管放入沸水浴中加热15分钟。
将离心管放在室温水浴中冷却5分钟。
向每个离心管中加入5ml异丙醇水溶液（1: 1）。
充分混匀后，用1cm比色皿，在520nm下测量每管溶液的吸光度（A520）（对于有絮状物的样品，如芒果，将样品离心后，把上清液用移液管小心转移至比色皿中，直接用离心管倾倒会将絮状物混到上清液中）。
每次测量之前，要先用待测溶液将比色皿润洗一下，倒掉润洗液，然后再进行测量。
在35分钟的冷却时间，内将所有待测溶液的A520检测完毕。
应戴乳胶手套，以避免茚三酮溶液滴溅到皮肤上，茚三酮溶液滴溅到皮肤上，会产生深紫色的色斑。
7•计算如果50 mg/L标准溶液的A值＜ 0.600，结果需经实验室主管的核准，才能上报结果，否则样品可能需要进行复测脯氨酸（mg/L） = （ A样品/ A标准溶液）x CC是标准溶液的浓度（通常为50 mg/L）对于脯氨酸含量的水果来说，结果必须要乘上稀释倍数（稀释后体积/原体积）对于浓缩果汁和蜂蜜来说，结果必须乘以稀释倍数（稀释后体积ml/预案重量g）结果用mg/kg表示8.参考资料AOAC官方分析方法出版时间15th Ed. （1990）方法编号979.20工作表脯氨酸样品编号# ___________________________________________ Date ________样品类型 ____________________________________________ Analyst ________样品标准稀释度(w/v) _______稀释度(v/v) _______离心管编号# _______空白管号 _______________A520吸光度___________A 520空白吸光度_________A 520 -----------如果50 mg/L标准溶液的A值＜ 0.600，结果需经实验室主管的核准,样品脯氨酸mg/L or mg/kg mg/L or mg/kg mg/L or mg/kg mg/L or mg/kg mg/L ormg/kg mg/L or mg/kg mg/L or mg/kgPROLINEPri ncipleThe prepared sample is treated with nin hydri n. Proli ne in the sample reacts to form an orange derivative. Absorba nee is measured at 520 nm versus appropriate reage nt bla nk.ApplicabilityThis method is applicable to the determ in ati on of proli ne in hon ey, fruit juices and concen trates. Other applicati ons of this method must be in dividually validated.Reagents and EquipmentProline 脯氨酸3% ninhydrin in 2-methoxy ethanol (0.3 g of ninhydrin dissolved in 10 mL 2-methoxyethanol is satisfactory; make up fresh daily)3%的茚三酮在2-甲氧基乙醇(0.3 g茚三酮溶解在10 mL 2-甲氧基乙醇；每天补充新的) 2-methoxy ethanol 2-甲氧基乙醇formic acid (96%) 蚁酸(96%) (甲酸)aqueous isopropanol (2- Propanol ) - diluted 1+1 水：异丙醇1：115 mL screw cap glass centrifuge tubes (be sure that there are no chips on the rim of the tube; dispose of chipped tubes) 15 mL 的带螺帽的玻璃离心管(确定管子的边没有破损；除掉有破损的瓶子) spectrophotometer set to measure absorbance at 520 nm 520 nm 测定吸光度1 cm glass cuvettes 1 cm 的玻璃小管Sample PreparationApple, pear and most berry juices are run single strength. 苹果，梨和多数浆果类的汁液是直接做。
Citrus juices are diluted 1+20 with water. 柑橘类的汁液要用水稀释 1 ：20 。
Other fruit juices should be diluted appropriately such that the proline concentration in the diluted sample is less than 50 mg/L (see dilution table). 其它水果汁液也应该适当的稀释使脯氨酸的浓度在稀释后达到小于50 mg/L 。
Fruit juice concentrates are diluted to single strength with water, and then further diluted appropriately. 浓缩果汁用水稀释到原来的浓度，然后再适当的稀释。
Honey is diluted 2.5 g to 50 mL with water. 蜂蜜取2.5 g 用50 mL 的水稀释。
Centifuge turbid samples for approximately 5 minutes prior to analysis to remove suspended material; use clear supernatant for analysis. 浑浊的样品，在分析前5 分钟离心，移去悬浮物，用清亮的浮在表面的去测。
Dilution Table for Single Strength JuiceDilutio n from ColorSin gle Stre ngth Bla nk Sample TypeApple 1 1yesApricot 21:1 yesAron ia 1 1yesBanana 1 1yes Blackberry 1 1yesCherry 1 1yesCran berry 1 1yesGrape 16:1 yes Grapefruit 21:1 noGuava 3:1 yesKiwi 1 1yesLem on 21:1 noLime 21:1 noMan dari n 21:1 noMango 1 1yesNectari ne 21:1 noOrange 21:1 noPapaya 1 1yesPassi on Fruit 1 1yesPeach 6:1 yesPin eapple 1 1yesPlum 7:1 yesPrune 16:1 yes Raspberry 5:1 yes Strawberry 1 1yesTan geri ne 21:1 noTomato 1 1yesStan dard Preparati onPrepare a proli ne stock soluti on (500 mg/L) by dissolvi ng 0.0500 g proli ne in water and mak ing up to 100 mL. This soluti on should be stored refrigerated and prepared fresh mon thly.准备脯氨酸标准储备溶液(500 mg/L):用水溶解0.0500 g脯氨酸至100 mL ,溶液保存到冰箱，每月配制新的标品。