天平，研钵，移液管，水浴锅，离心机，试管，722型分光 光度计
实验步骤： 实验步骤：
1、准备实验材料
提前7-10天培养小麦材料并根据实验目的对其分组处理， 以备后用。 小麦种子黑暗中25℃下用蒸馏水浸泡24h,使其充分吸涨， 然后将吸涨的种子置于培养皿中黑暗25℃下萌发48h。将萌发 一致的种子播种于培养皿中,用1/2的Hoagland营养液培养. 材料在第一片新叶完全展开后分为两组，第一组作为对 材料在第一片新叶完全展开后分为两组，第一组作为对 处理组， 继续浇灌1/2Hoagland溶液；第二组为 溶液； 照,继续浇灌 继续浇灌 溶液 第二组为NaCl处理组，浇灌 处理组 溶液;继续培养三天后 含0.8%NaCl的1/2Hoagland溶液 继续培养三天后，取地上部 的 溶液 继续培养三天后， 分以备实验用。 分以备实验用。
3、NaCl胁迫对小麦脯氨酸含量的影响 、 胁迫对小麦脯氨酸含量的影响
分别取对照和Ｎ 处理的小麦幼苗的地上部分 处理的小麦幼苗的地上部分（ 分别取对照和ＮaCl处理的小麦幼苗的地上部分（芽鞘 和叶子） 磺基水杨酸５ 研磨提取 研磨提取， 和叶子）0.3g，用３%磺基水杨酸５ml研磨提取，匀浆移 ， 磺基水杨酸 分钟， 人造沸石充 至试管中， 沸水浴中提取10分钟 加入0.5g人造沸石充 人造沸石 至试管中，在沸水浴中提取 分钟，加入 分震荡，冷却后转移至离心管中， 离心10min， 分震荡，冷却后转移至离心管中，3000r/min离心 离心 ， 取上清液待测。 取上清液待测。 各取对照和Ｎ 处理的提取上清液２ ， 处理的提取上清液 各取对照和ＮaCl处理的提取上清液２ml，分别加入 蒸馏水， 冰醋酸和 酸性茚三酮试剂， ２ml蒸馏水， １ml冰醋酸和３ml２.５ %酸性茚三酮试剂， 蒸馏水 冰醋酸 ２ ５ 酸性茚三酮试剂 与上述制作标准曲线一样进行显色，萃取和比色， 与上述制作标准曲线一样进行显色，萃取和比色，最后从 标准曲线中查得脯氨酸含量。按照公式计算,植物体内 植物体内脯氨 标准曲线中查得脯氨酸含量。按照公式计算 植物体内脯氨 酸含量（ 其中Ａ 酸含量（ug/g）=４A×２.５/0.3,其中Ａ为查表所得的脯氨 ） ４ × ５ 其中 酸。
植物体内游离脯氨酸含 量的测定
实验目的： 实验目的：
1、学习脯氨酸含量测定方法； 2、研究盐胁迫等逆境对植物体内脯 氨酸含量的影响。
实验原理： 实验原理
胁迫条件下植物体内脯氨酸大量积累，而且胁 迫时间越长,积累的脯氨酸越多；因此植物体内的脯 氨酸含量在一定程度上反映了植物受胁迫影响的程 度，可作为植物对逆境响应的一个参考指标。 在酸性条件下，茚三酮和脯氨酸反应，生成红 色化合物，此产物在520nm波长下具有最大吸收峰， 可用分光光度计测定，此法具有专一性。在pH1-7时 用人造沸石可以除去一些干扰的氨基酸。
注意事项：
•配置的酸性茚三酮溶液仅在24h内稳定，因此最好 现用现配； •提取、反应要充分； •离心前必须平衡； •甲苯有毒，需格外小心。
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仪器与试剂：
1、实验试剂：
３%磺基水杨酸，甲苯，冰醋酸，人造沸石， 酸性茚三酮试剂（25g茚三酮溶于60ml冰醋酸和40ml 6mol/L磷酸中,加热（70℃）溶解。常温保存期24h，冰箱中保存 48h）， 标准脯氨酸溶液（10mg脯氨酸溶于100ml80％乙醇中，浓度 为100ug/ug/ml脯氨酸配置成 、0.5、1.0、5、10、20µg/ml 脯氨酸配置成0、0.5、1.0、 10、20µ 脯氨酸配置成 一系列浓度的标准溶液。取标准溶液各2ml，加入2ml３ 一系列浓度的标准溶液。取标准溶液各2ml，加入2ml３%磺 2ml 2ml 基水杨酸、 ml冰醋酸和 ml茚三酮试剂于加塞试管中， 冰醋酸和３ 茚三酮试剂于加塞试管中 基水杨酸、１ml冰醋酸和３ml茚三酮试剂于加塞试管中，充 分混匀后在沸水浴中加热显色40min，冷却后加入４ml甲苯 沸水浴中加热显色40min 分混匀后在沸水浴中加热显色40min，冷却后加入４ml甲苯 盖好盖子充分震荡，待其静置分层 静置分层后 吸取红色甲苯相， 盖好盖子充分震荡，待其静置分层后，吸取红色甲苯相，于 520nm测定OD值 值为纵坐标， 波长520nm测定OD 值为纵坐标 波长520nm测定OD值，以OD值为纵坐标，脯氨酸浓度 为横坐标绘制标准曲线。 （ µg/ml ）为横坐标绘制标准曲线。