布氏杆菌病(RBPT 、SAT） 依据 动物布鲁氏菌病诊断技术》 《动物布鲁氏菌病诊断技术》 GB/T18646GB/T18646-2002
虎红平板凝集试验
简便、快速易行， 具有较好的特异性， 有一定的敏感性， 检查牛的阳性率稍 高于绵山羊。 高于绵山羊。 该法可用于大面积 检疫。
弃掉0.5 弃掉0.5 0.5
菌液 1 2 3 4 5 6 7
0.5 0.5 0.5 0.5
结 果
试管凝集试验原理
布鲁氏菌试管凝集试验设计
单位：ml
比浊管的制备
管号 1 2 3 4 5 1:40稀释抗原 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 石炭酸 盐水 1.00 0.75 0.50 0.25 0.00 清亮度 100% 75% 50% 25% 0% 标记
布鲁氏菌的诊断
1：50—1：100++以上 50 1 100++以上 目前国内定1 100++，但国际定1 目前国内定1：100++，但国际定1：160++ 对半年内有菌苗接触史者，虽达1 100—1 对半年内有菌苗接触史者，虽达1：100 1： 160++， 160++，过2—4周应再次检查，效价升高1倍 4周应再次检查，效价升高1 以上方能确定，最好用补体结和试验检查。 以上方能确定，最好用补体结和试验检查。 补体结合试验1 10＋＋ ＋＋以上 补体结合试验1：10＋＋以上
评价：试管凝集试验是Wright Sample于1898年首 Wright和 评价：试管凝集试验是Wright和Sample于1898年首 先建立的， 先建立的，是布病诊断在国际上唯一的全标化 方法，使用广泛，经久不衰。特异性好， 方法，使用广泛，经久不衰。特异性好，也较 敏感，实用性强，诊断、流调、监测均适用。 敏感，实用性强，诊断、流调、监测均适用。 缺点： 缺点： — 有前带现象。 有前带现象。 — 不能区别人工免疫和自然感染。 不能区别人工免疫和自然感染。 — 产生一定的交叉反应。 产生一定的交叉反应。 — 慢，需要两天。 需要两天。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
结果判定
-：细菌不被凝集，液体混浊、无透明度，管底无伞状 沉淀，但由于菌体自然下沉，管底中央出现圆点状沉淀， 振荡时复呈均匀混浊状态。 +：液体透明度不明显（25%清亮），25%菌体凝集，管 底有少许不明显的伞状沉淀。 ++：液体中等混浊（50%清亮），50%菌体凝集，管底有 中等量的伞状沉淀，振荡时呈小絮片状。 +++：液体几乎透明（75%清亮），75%菌体凝集，管底 有明显的伞状沉淀，振荡时呈小或大絮片状。 ++++：液体完全透明（100%清亮），100%菌体凝集，管 底出现大片的伞状沉淀，振荡时呈大絮片状，但可打碎 成小絮片状。
凝集试验应注意的问题
结果判为可疑时， 结果判为可疑时，隔2-3周后采血重做。阳性畜 周后采血重做。 重检时仍为可疑，可判为阳性。 群，重检时仍为可疑，可判为阳性。对同群中 既无临床症状又无凝集反应阳性者， 既无临床症状又无凝集反应阳性者，马、猪重 检仍为可疑，判阴性；牛、羊重检仍为可疑者， 检仍为可疑，判阴性； 羊重检仍为可疑者， 可判为阳性，或以补体结合反应核对。 可判为阳性，或以补体结合反应核对。 试管凝集反应时， 试管凝集反应时，凝集价高的血清在最初一两 管往往由于抗体还剩而抑制凝集，即前带现象。 管往往由于抗体还剩而抑制凝集，即前带现象。 玻板凝集、玻片凝集试验应当在20℃ 20℃以上室温 玻板凝集、玻片凝集试验应当在20℃以上室温 条件下进行。 条件下进行。
凝集试验应注意的问题
使用前应充分摇匀， 使用前应充分摇匀，出现污染或有摇震不 散的凝块时不得使用。 散的凝块时不得使用。 抗原和血清应在室温中放置50 60min后 50抗原和血清应在室温中放置50-60min后， 再进行试验。 再进行试验。 防止被检血清冻结和受热， 防止被检血清冻结和受热，以免影响凝集 价。 试验中所用试管、吸管、玻板、 试验中所用试管、吸管、玻板、玻片等必 须清洁。 须清洁。
凝集试验应注意的问题
某此细菌（ 型细菌） 某此细菌（如R型细菌）当制成细菌悬液时 很不稳定，在没有特异性抗体存在下， 很不稳定，在没有特异性抗体存在下，亦 可发生凝集，谓之自凝。 可发生凝集，谓之自凝。某些理化因素亦 可引起非特异性凝集，pH降至3.0以下时 降至3.0以下时, 可引起非特异性凝集，pH降至3.0以下时, 即可起抗原悬液的自凝, 称为酸凝集。因 即可起抗原悬液的自凝, 称为酸凝集。 试验时必须设置阳性血清、 此，试验时必须设置阳性血清、阴性血清 和抗原等对照，避免假阳性、 和抗原等对照，避免假阳性、假阴性的结 果。
++++ +++ ++ +
-
结果判定
全部试管于充分振荡后置37-38℃恒温箱 中22-24h，判定结果。 判定标准根据反应的有无及其强度进行判 定，以各管中上层液体的清亮度记录凝集 反应的强度（凝集价），特别是50%清亮 度（即“++”的凝集）对判定结果关系很 大，需用比浊管对照判定，并以-、+、++、 +++、++++记录结果。