实验五 诱导细胞融合——聚乙二醇法
一、实验目的
了解细胞融合的原理，初步掌握用PEG诱导
细胞融合的方法。
二、实验原理 聚乙二醇（PEG）结构为： CH2(OH)-(CH20CH2)n-CH2OH；
相对分子质量在2000-6000均可用作细胞融合剂。

普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构， 使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，
பைடு நூலகம்

50％PEG混合液配置：称取少许PEG放人刻度离心 管内，在沸水浴中加热， 使其溶化，待冷却至50℃
时，加入预热至50℃的等体积的GKN液，混匀。注
意使用前配制。

6.取悬液1mL到7ml离心管中，加入0.5～0.8 mL预热
的50％PEG （慢慢沿着离心管壁逐滴加入，边加边
轻摇离心管,使其混匀），38℃水浴中温浴30min。
箱，电炉， 量筒，离 心管，注射器，试管， 移液管，烧杯， 吸管， 载玻片，盖玻片，显微
镜
四、实验步骤
1.鸡血红细胞悬液的制备：

用注射器吸入 1mL Alsver液后从鸡翼下静脉取鸡血 2mL，注 入刻度离心管内，按照3：1(V/V)加入 6mL Alsver液混匀，放入4℃冰箱内可保存3~4天。

7.缓慢加入Hanks液5ml以终止PEG的作用，轻轻吹 打混匀，38℃水浴中静止5min。 8.1000r/min离心5min，去上清，指弹使细胞团分散 9.取细胞悬液1滴滴于载玻片上，盖上盖玻片直接镜 检；或加入台盼蓝溶液1滴，染色3分钟盖上盖玻片， 显微镜下观察细胞融合现象。


10.进行多个视野的测定，统计细胞平均融合率。
由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼
此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。

细胞融合率是指在显微镜的一个视野内，已发生融
合的细胞其细胞核总数与该视野内所有细胞(包括
已融合的细胞)的细胞核总数之比，通常以百分比
表示。
三、实验材料与用品
材料：鸡血红细胞 试剂： 仪器：离心机，水浴
（1）Alsver液： （2）0.85％生理盐水： （3）GKN液： （4）Ringer溶液： （5）Hanks液： （6）50％PEG混合液 （7）0.2%次甲基蓝
五、结果与分析

1、绘制观察到的融合细胞图，计算观察到的细胞
融合率；

2、简述聚乙二醇法诱导细胞融合的原理及影响融 合的关键因素。
六、注意事项
如抗凝血要保存在冰箱，抗凝剂预先要进行
灭菌，采血在无菌条件下进行。
PEG有毒，请操作过程中勿沾到皮肤上。

2.取细胞悬液1mL，移人7mL离心管， 加入4mL
0.85％生理盐水混匀；2000r/min离心5 min。

3.弃上清液（用吸管吸去），加0.85％生理 盐水至
5mL，混匀后2000r/min离心5min。

4.重复上述条件，再离心洗涤1次。 5.收集最后1次离心沉淀的血细胞，加入 适量的 GKN液溶液，按压积红细胞体积配成10％的红细胞 悬液。