Fig. 1 Absorption spectra
1. uric aci d ; 2. tet racyan oet hlene ; 3. complex in w ater s ol ution.
Fig. 2 Effect of solvents
3. 2. 4 四氰乙烯用量 结果表明 , 当四氰乙烯用量在 2. 0 ～ 3. 0 mL 时 , 配合物的吸光度值最大且相对稳 定 。 本文选择四氰乙烯用量为 3. 0 mL 。 3. 3 配合物的组成 用摩尔比法与等摩尔连续变化法分别测定了配合物的组成 。 结果表明 , 尿酸与四氰乙烯的配合比为 1∶ 2。 3. 4 工作曲线及灵敏度 分别取不同量的尿酸标准溶液 , 按实验方法测量其吸光度值 A , 绘制工作曲线 。 表明尿酸浓度在 5. 7 × 10 - 6 ～ 5. 7 × 10 - 6 m ol L - 1 范围内符合比耳定律 。 线性方程为 A =0. 0449c +0. 0121 , 相关系数 R 2 = 0. 999 , 表观摩尔吸光系数 ε =6. 24 × 104 L m ol - 1 cm - 1 。 3. 5 干扰试验 在最佳条件下 , 考察了其他物质对尿酸测定的干扰 。 结果表明 : 10 倍的 D树胶醛糖 、 DLα 氨基丙酸 、 麦芽糖 、L赖氨酸 ; 100 倍的肌肝 、Fe 3. 6 反应机理的探讨 尿酸分子中的咪唑环和嘧啶环上氮原子含有孤对电子 , 可作为电子给予体 , 而四氰乙烯是一个良好的 Π电子接受体 , 在水溶液中可形成稳定的 1∶ 2配合物 , 在波长 395 nm 处具有较强的配合物特征吸收峰 , 其 形成过程可表示如下 :
2 实验部分
2. 1 主要仪器与试剂 WFZ26A 紫外可见分光光度计(天津市光学仪器厂); KQ3200 超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。 尿酸(99 %, Sigm a 公司), 标准溶液用 0. 1 mol / L 的 NaOH 助溶 , 再用水配成 1. 14 ×10 m ol / L ; 四氰 -3 乙烯(98 %, A Johnson M at they Co mpany)配成 1. 01 × 10 mo l /L 乙醇溶液 。 其它试剂均为分析纯 , 实验 用水为二次去离子水 。 2. 2 实验方法 于 10 mL 具塞比色管中 , 加入一定量 1. 14 ×10 mol / L 的尿酸溶液 , 然后加入 3. 0 m L 1. 01 ×10 mol / L 的四氰乙烯溶液 , 用水定容至刻度 , 摇匀 , 室温下放置 10 min 后 , 用 1 cm 的比色皿 , 以试剂空白为 参比 , 在波长 395 nm 处测定吸光度 A 。
m ax = max = 乙烯的 λ 239 nm ; 在水介质中配合物的 λ 395 nm 。 因此 , 选择水介质中的 λ max 395 nm 作为尿酸分析
的条件 。 3. 2 实验条件的选择 3. 2. 1 溶剂 分别对二甲亚砜 、 丙酮 、 水、 甲醇 、 乙醇 、乙 腈、 氯仿 、 二氯甲烷等不同溶剂进行了考察 。 结果表明 : 以 在水介质中相应配合物的检测灵敏度最高( 见图 2)。 3. 2. 2 酸度 实验结果表 明 , 当溶液的 pH =5. 0 ～ 8. 0时 , 配合物的吸光 度值较大 , 且较稳定 。 故选择在 中性介质中测定 。 3. 2. 3 反应温度和反应时间 实验结果表明 , 在水介 质中尿酸与四氰乙烯的荷移反应受反应时间和反应温 度的影响较小 。 所形成的荷移配合物反应温度在 16 ～ 50 ℃间 、 时间在 5 ～ 40 min 间吸光度 A 均无明显变化 。 最后 , 选择反应温度为室温和反应时间为 10 min 。
Table 1 Determination results of human urine samples Sample s U rine 1 U rine 2 U rine 3 U rine 4 Content in sample s A dded ( ×10 - 6 mol /L) ( ×10 - 6 mol /L) 0. 695 3. 01 2. 89 3. 37 0. 171 0. 57 1. 71 1. 14 Found ( ×10 - 6 mol / L) 0. 879 3. 55 4. 78 4. 49 RSD ( %) 1. 91 2. 03 2. 10 1. 89 Reco very (%) 107. 6 96. 4 110. 5 98. 2
(山西师范大学化学与材料科学学院 , 山西临汾 041000) 摘 要: 本文采用紫外分光光度法研究了尿酸与四氰乙烯之间的荷移反应 。 尿酸与四 氰乙烯可以形成淡绿色的荷移配合物 , 其配合比为 1∶ 2 。 在测定波长 395 nm 处 , 该配 合物的表观摩尔吸光系数 ε =6. 24 ×10 L m ol cm , 方法线性范围为 5. 7 ×10 ～ -6 -1 5. 7 ×10 mo l L 。 应用本法测定了人体代谢物中尿酸的含量 , 回收率为 96. 4 %～ 110. 5 %, 相对标准偏差(RSD)为 1. 98 % (n =7)。 关键词 : 尿酸 ; 四氰乙烯 ; 紫外分光光度法 ; 荷移反应 中图分类号 : O657. 3 文献标识码 : A
4 -1 -1 -7
*
1 前言
尿酸是尿中主要非蛋白氮类代谢物 , 正常时其在体内的形成 、 分布与排泄处于平衡状态 , 但患肾病时 其值会发生变化 。 因此 , 准确测定其在尿液中的含量 , 可以了解体内物质代谢状况 , 对临床诊断[ 1] (如对痛 风、 高尿酸血症 、 L eschNyhan 综合症)具有重要的参考价值 , 为代谢疾病的治疗及研制新的药物提供可靠 的科学依据 。 目前 , 测定尿酸的方法主要有 : 酶法[ 2] 、H P LC 法[ 3 、4] 、化学发光法[ 5 - 8] 及电化学法[ 9 、10] 等 。 尿酸分子 的咪唑环和嘧啶环上氮原子含有孤对电子 , 是一个良好的电子给予体 , 能与电子接受体发生荷移反应 。 用 荷移反应紫外分光光度法测定尿酸未见文献报道 。 本文报道了尿酸与四氰乙烯形成荷移配合物的条件 、光谱特性 , 揭示它们之间的相互作用机理 , 建立 了一种测定尿酸的紫外光谱新方法 。 该法操作简便 、 快速 、灵敏度高 、 选择性和重现性好 , 可直接用于人体 尿液中尿酸含量的常规分析 。
2+
、 Fe
3+
、 Al
3+
; 1 000 倍的葡萄糖 、 Na 、K 、 Cl 、 Ca 对测定无干扰 。
+
+
-
2+
但 2 倍的抗坏血酸 、肌酸 、 马尿酸干扰测定 。
168
第2期
分析科学学报
第 22 卷
4 样品分析
直接稀释尿液样品至所需浓度 , 按照实验方法进行测定 。 分析了 4 个人体尿样 (包括小孩 、成人 、肾 病患者), 结果见表 1 。表 1 中所列的含量是指尿样品经过稀释后的含量 。
参考文献 :
[ 1] Zen J M , Jou J J and I lango van G . A naly st[ J] , 1998 , 123 : 1345. [ 2] LI U Bao ho ng(刘宝红), DENG Jia qi(邓家祺) , H U Ren qi(胡仁其). Chinese J. Anal. Chem. (分析化学) [ J] , 1997 , 25(1) : 19. [ 3] Slaun white W D , P achla L A , Wenke D C , Kissing er P T . Clin. Chem. [ J] , 1975 , 21(10): 1427. [ 4] SON G Yanxi(宋燕西) , Z HA NG H ai x ia(张海 霞), L IU M ancang(刘满仓). Chinese J. A nal. Chem. (分析化 学) [ J] , 1999 , 27(2) : 243. [ 5] K ubo H and T oriba A. A nalytica Chimica[ J] , 1997 , 353 : 345. [ 6] Song Z H and Ho u S. Anal. Bioanal. Chem. [ J] , 2002 , 372 : 327. [ 7] H an Suqin , Liu Er bao and Li H ua. A nalytical Science[ J] , 2005 , 21(4) : 111. [ 8] ZH A NG Dao jian(张道建) , H U A NG Yuming(黄玉明) , ZH A NG Zhujun(章竹君). Chinese J. A nal. Chem. (分析化 学) [ J] , 2001 , 29(4): 446. [ 9] L IU Ling fang(刘灵芳), WA N G Cui hong(王翠红), ZH A NG Juan(张 娟) , Y E Bao xian(冶保献). T ournal of Tianjin N o rna l U niva rsity(N atural Science Ed. )(天 津师范大学学报(自然科学版)) [ J] , 2001 , 21(4) : 28. [ 10] Pa rk G , Adams R N , White W R. A nal. L ett. [ J] , 1972 , 5(12) : 8.
-8 -3 -3
收稿日期 : 2005 0726 修回日期 : 2005 10 25 基金项目 : 山西省自然科学基金(N o. 20051022) ; 山西师范大学校基金资助项目(2005) 通讯联系人 : 柴宜民 , 女 , 实验师 .
167
第2期
柴宜民等 : 荷 移反应紫外分光光度法测定尿酸
第 22 卷
3 结果与讨论
3. 1 吸收光谱 准确移取尿酸标准溶液 1. 0 mL , 以试剂空白为参 比 , 分别对尿酸溶液 、 四氰乙烯溶液 、 以及反应 10 min 后的尿酸与四氰乙烯的溶液进行紫外光谱扫描 , 所得 的吸收3 nm ; 四氰