1、季节性特点： 以夏、秋季，尤其是6～10月为多见。
2、食品种类 －剩饭，特别是大米饭。
－乳及乳制品、畜禽肉类制品、蔬菜、莱汤、马铃薯、 豆芽、甜点心、调味汁、色拉。
国内：与淀粉质食品相关多。
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
3、临床症状
呕吐型中毒：多见于过剩米饭和油炒饭，由耐热性肠 毒素为致病因素；潜伏期短，一般为2～3小时，最短为 30分钟，最长5～6小时；症状以呕吐，腹痉挛为主，腹 泻则少见，一般经过8～10小时而治愈。
25×4/5×104×10＝ 2×106实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
3．分离培养 • 将检样或其稀释液划线于上述选择性培养基平板上
，置37℃培养12～20h，挑取可疑蜡样芽孢杆菌的 菌落接种于肉汤和营养琼脂培养基上做纯培养，然 后做证实试验。
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4．证实试验 （1）形态观察 • 本菌应为G＋杆菌，宽度在1μm或1μm以上，芽孢呈
蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)的检验
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
（一）蜡样芽胞杆菌生物学性状
1、形态和染色特性 该菌为革兰氏阳性的大杆菌，菌体两端较平整，芽胞 呈椭圆形，位于菌体中央稍偏一端,多呈链状排列,无荚 膜，有周鞭毛。
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2、培养特性
（1）需氧菌，生长温度范围在10-45℃之间。最 适
生长温度为28-35℃。
（2）在普通培养基上生长良好。 本菌在普通琼脂平板上，生长 的菌落呈乳白色，不透明，直 径4-6mm,边缘不整齐，表面 粗糙，呈毛玻璃状或白蜡状。
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（3）在血液琼脂平板上形成 浅灰色、不透明、似毛玻璃 状的菌落。菌落周围初呈草 绿色溶血,时间稍长即完全透 明。
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• 计数后，从中挑取5个这样的菌落作证实试验。根 据试验证实为蜡样芽孢杆菌的菌落数，计算出该 培养皿内的蜡样芽孢杆菌数，然后乘其稀释倍数 即得每克或每毫升样品所含的蜡样芽孢杆菌数。
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选取具有15-150个典型或可疑蜡样芽孢杆菌菌落的平板, 进行计数。计算同一稀释度两个平板的平均菌落数。
10-1~10-5的 稀释液的制备
每个稀释度 36±1℃2~20h
36±1℃ 12~20h
挑取菌落接种肉汤和营养琼脂培养基（分离培养）
形态观察
证实试验
染色镜检 培养特性 生化特性
报告
生化分型
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2．菌数测定 • 以无菌操作将检样25g或25 ml按菌落总数测定方式，
用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10-1～10-5的稀释 液。取各稀释液0.1ml，接种在选择培养基（甘露醇卵 黄多黏菌素琼脂）平板上，用L形棒涂布于整个表面， 置37℃培养12～20h后，选取菌落数在30个左右者进 行计数。蜡样芽孢杆菌在此培养基上生成的菌落为红色 （表示不发酵甘露醇）,环绕有白色至淡粉红色的晕（表 示产生卵磷脂酶）。
计数后，从中挑取5个此种菌落做证实试验，根据证实的 蜡样芽孢杆菌的菌落数，计算出该平板上的菌落数，然后 乘其稀释倍数，即得每克（毫升）样品中所含蜡样芽胞杆 菌数。
例如将0.1mL 10-4样品稀释液涂布于MYP平板上，其可 疑菌落为25个，取5个鉴定，证实四个菌落为蜡样芽孢杆菌， 则1g（mL）检样中所含蜡样芽孢杆菌数为：
型中毒的致病因素,常在米饭中形成。
不耐热肠毒素：是引起腹泻型胃肠炎的病因，能在各种 食物中形成。
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5、抵抗力
蜡样芽胞杆菌100 ℃ 20分钟即可被杀死；对酸 碱不敏感，pH6-11对本菌基本上不受影响， pH5以下，生长可受到抑制。
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（二）流行病学特点
（2）硝酸盐还原试验：阳性（红色）。
（3） V-P试验：接种于改良V-P培养基中，35℃ 培养48 h。加V-P试剂及肌酸数粒，静止 1h，应为阳性反应（伊红色）。
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（4）L-酪氨酸分解试验：接种于L-酪氨酸琼脂培 养基上，35℃培养48 h,阳性反应菌落周围培 养基应出现澄清透明区（表示产生酪蛋白 酶）。阴性时应继续培养72 h再观察。
中华人民共和国国家 标准食品卫生微生物 学检验蜡样芽孢杆菌 检验GB/T 4789.282003
选择性培养基（菌数测定） MYP
36 ℃ ±1℃ 12h~20h
选择性培养基（分离培养） MYP
36 ℃ ±1℃ 12h~20h
菌数计算
营养琼脂培养基
生长及菌落观察 染色镜检 生化试验 菌株保存
报告
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（4）蜡状芽胞杆菌在甘露醇 卵黄多粘菌素琼脂(MYP) 上的菌落为粉红色(表示不发 酵甘露醇)，周围有粉红色的 晕（表示产生卵磷脂实酶验食）品中。蜡样芽孢杆菌检验
（5）在普通肉汤内生长迅速，肉汤混浊，常 常有菌膜或壁环，振摇易乳化。
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3、生化性状：
（1）葡萄糖发酵试验：接种于酚红葡萄糖肉汤中， 厌氧条件下35℃培养24h。培养基应由红色变 为黄色。 （表明本菌在厌氧条件下分解葡萄糖产酸）
卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。 （2）培养特性 • 本菌在肉汤中生长混浊，常有菌膜或壁环，振摇易乳化
。琼脂平板上形成的菌落不透明，表面粗糙，似毛玻璃 状或融蜡状且边缘不齐。
（5）溶菌酶试验：用直径2mm接种环取纯菌悬液 一环,接种于溶菌酶肉汤中，35℃培养24h。 该菌在本培养基（含0.001％的溶菌酶）中能 生长。如出现阴性反应,应继续培养24 h。
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4、致病性
蜡样芽胞杆菌引起食物中毒，除必须具有大量的细菌外， 肠毒素也是重要的致病因素。
耐热性肠毒素：100℃30分钟不能被破坏，为引起呕 吐
腹泻型中毒：由各种食品中不耐热肠毒素引起，潜伏 期在6小时以上，一般为6～14小时；症状以腹泻，腹痉 挛，而呕吐却不常见；病程24～36小时。
实验食品中蜡样芽孢杆菌检验
（三）检测方法
检样
25g(ml)+225ml生理盐水
1.蜡样芽孢杆菌检验程序：
做成10-1-10-5的稀释液 37℃，18h-24h