1 冰冻切片先固定还是先切片，是否需要置于室温放置30分钟，针对脑组织具体用什么固定剂和固定步骤比较好？
我们实验室鼠脑冰冻切片采用4%的多聚甲醛固定，小鼠直接灌注saline20ml，4%多聚甲醛20ml 经左心室固定然后取材在4度4%多聚甲醛后固定4-6h，浸20%-30%糖沉底，就可以切片，切片首先需要冰冻切片机，我们的leica1900的，不知道lz那里有没有这个机子，还又一种原始的自己刷冻台的那种，比较麻烦，切片厚度大概选择20-40um差不多
2 有人说石蜡切片的清晰度比冰冻切片更高，是否属实？
由于石蜡切片的厚度在4-6um之间，这是冰冻切片远远达不到的境界，这要根据你的实验选择，神经元的直径一般在10-12um之间，这样冰冻切片如果做双标最好选择免疫荧光。

但是冰冻切片抗原保护的比石蜡好。

3 脑组织的冰冻切片怎么保存最好？
冰冻切片一般现切现做，如果实在要保存就浸泡在0.01mpbs4度保存最多一个星期，尽量切完片子就做。