高效液相色谱指纹图谱的梯度条件优化
一、实验目的
1．进一步熟悉高效液相仪的操作。

2．学习梯度洗提的参数优化。

二、仪器与样品
1. HP1200高效液相色谱仪,配自动进样器，高压两元梯度泵及二极管阵列检测器。

2. 手动进样器，低压四元梯度泵，可变波长紫外检测器。

3. 色谱柱：Agilent C18键合固定相（15cm*
4.6mm，5um）。

4．茵陈药材
5. 甲醇（HPLC grade），H
3PO
4
（AR），纯净水，绿原酸标样
三．样品预处理
称取1克茵陈，用10ml甲醇/水（50/50）超声提取20分钟，过0.45um微孔滤膜,备用。

四．初始分析条件
(1) 流动相与梯度：根据文献自行设计
(2) 检测波长：根据文献自行设计
(3) 流速：0.8-1.0ml/min
(4) 柱温：室温
(5) 进样量：10-20uL
五．实验内容
根据初始条件下的分离情况，调整梯度洗脱参数，如起始浓度，斜率等，实现绿原酸类组分的基线分离。

六. 思考
（1）梯度洗脱与等度洗脱相比，各有何优缺点？
（2）对于复杂样品，你该如何着手开始实验？
（3）该实验中如何进行定性与定量分析？你认为影响定量准确度的因素可能会有哪些？。