B 乙腈-20mM磷酸氢二铵, pH=10.0 检测波长：254nm
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流动相组成对药物保留行为的影响 组成：生物碱1、2、3、4 检测波长：280nm 色谱柱：Kromasil 15cm4.6mm 流动相：A PiCB6流动相-PICB7流动相＝1：1
B PiCB6流动相-PICB7流动相＝4：6 PICB6流动相：己烷磺酸钠1.88g＋甲醇260ml置1000ml量瓶中，用水稀释至刻度 PICB7流动相：庚烷磺酸钠0.28g ＋甲醇260ml置1000ml量瓶中，用水稀释至刻度
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四、定性鉴别
（二）薄层鉴别 1、展开系统：乙二胺、氨水 P122
正丁醇-盐酸-水（4:1:0.5）生物碱盐 2、对薄层板改性：1~2%NaOH溶液
例：黄连中生物碱 苯-EtOAc-MeOH-异丙醇-水 （6:3:1.5:1.5:0.3） 置氨水饱和的展开槽
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四、定性鉴别
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C PiCB6流动相-PICB7流动相＝1：1
D PiCB6流动相-PICB7流动相＝9：1
流动相组成对药物保留行为的影响 色谱柱：Kromasil 15cm4.6mm 检测波长：280nm PICB6：己烷磺酸钠1.88g ＋甲醇260ml置1000ml量瓶中，用1%的醋酸稀释至刻度。 PICB7：庚烷磺酸钠0.28g ＋甲醇260ml置1000ml量瓶中，用1%的醋酸稀释至刻度。
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生物碱与毒品
OH NH
麻黄碱
OH NH
伪麻黄碱
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NH
冰毒
第一节 生物碱
一、概 述
黄连：小檗碱、巴马汀、药根碱、表小檗碱 马钱子：马钱子碱、士的宁 麻黄：麻黄碱、伪麻黄碱 苦参：苦参碱、氧化苦化碱 益母草、延胡索、黄柏、贝母
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二、理化性质
1、结构：C、H、O、N，碱性
3、离子交换树脂法：
益母草流浸膏（药典P280）
水苏碱的含量测定：
O
取本品5g → 盐酸调pH1~2 → N
O
加置强酸型阳离子树脂柱 → 水洗
脱（弃去） → 氨水洗脱 → 收集
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四、定性鉴别
（一）理化鉴别 马钱子散：马钱子、地龙
取马钱子散→加浓氨试液→三氯甲烷 浸泡→滤过→滤液蒸干→加稀盐酸→加 碘化铋钾试液→黄棕色沉淀
测定方法： 1、沉淀过滤，溶于丙酮，直接测定A 2、滤除沉淀后，测定残存的过量雷氏盐， 间接计算
又如：产妇康颗粒
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五、含量测定
（二）单体成分 1、HPLC： ①离子抑制色谱：二乙胺、三乙胺
例：浙贝母 药典P205
②离子对色谱：SDS、辛烷基磺酸钠 常加入缓冲盐
例： HPLC测小檗碱
迁移速度：阳离子> 中性分子> 阴离子
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五、含量测定
HPCE的平面流型 HPLC的抛物线流型
高效毛细管电泳法测定黄柏中盐酸小檗碱和盐酸巴马汀 ——中国药学杂志 2019，40（17）：1343
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黄连
五、含量测定
3、高效毛细管电泳法（HPCE）
原理：电场下溶液中不同荷电物质迁移速度不同
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五、含量测定
原因：管内壁硅羟基解离释放H+使溶液带正电
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五、含量测定 电渗：溶液在电场作用下整体向负极移动 电泳：带电离子在电场作用下的定向运动
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虞美人 —— 李煜
春花秋月何时了， 往事知多少！ 小楼昨夜又东风， 故国不堪回首月明中。 雕栏玉砌应犹在， 只是朱颜改。 问君能有几多愁？ 恰似一江春水向东流！
腰直不起，头足相就，状如 牵机而死——强直性惊厥
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马钱子
生物碱与兴奋剂
1988年奥运会 ，卡尔·刘易斯 ，麻黄碱 1992年奥运会，巫丹，士的宁 1992年奥运会 ，玛丽·乔·费尔南德斯 ，伪麻黄碱 1994年世界杯，马拉多纳，麻黄碱 2000年奥运会 ，拉杜坎，麻黄碱
pH=3.0
pH=10.0
流动相pH值对保留时间的影响 色谱柱：NucleodurC18 15cm4mm 流动相：乙腈-10mM 碳酸氢铵＝50：50, A：pH=3.0 B：pH=10.0 检测波长：240nm
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pH=2.5
pH=10.0
流动相pH值对保留时间的影响 色谱柱：NucleodurC18 15cm4mm 流动相：梯度洗脱程序 A 乙腈-20mM 磷酸氢二铵, pH=2.5
OH NO2
NO2
沉淀特点：酸性水溶液（苦味酸在中性）中
沉淀常易溶于有机溶剂
沉淀有颜色
干扰：蛋白质、多肽、鞣质
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二、理化性质
4、光谱特征 小檗碱：225 、 270 、 331nm
366nm下 有荧光 麻黄碱：210nm
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三、供试品溶液的制备
1、有机溶剂提取法： 碱化+ CHCl3
3、检视： 1）365nm下看荧光
例：黄连：小檗碱
2）显色剂： ①改良碘化铋钾 ②稀碘化铋钾+亚硝酸钠乙醇液
例：苦参：氧化苦参碱（药典P141）
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五、含量测定
（一）总生物碱 1、酸碱滴定法：返滴法 2、分光光度法
直接测定法：小檗碱 比色法：苦味酸、雷氏盐 P125 排除干扰：化学分离、柱色谱
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浙贝母中贝母甲素和贝母乙素
乙腈-水-二乙胺（70：30：0.03）
牛黄千金散中盐酸小檗碱
乙腈-水（50：50） 每100ml含0.34g KH2PO4和0.17g SDS
小儿清热止咳口服液中盐酸麻黄碱
乙腈-0.1%磷酸溶液（含0.1%三乙胺）（3:97）
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流动相缓冲盐的pH值对药物的保留行为有影响，甚 至会显著改变某些碱性药物的保留行为如图所示。
O
OH
O
NH
麻黄碱
N+ OCH3
OCH3
小檗碱
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二、理化性质
2、溶解性 亲脂性：大多数，氯仿中溶解度最大 亲水性：少，季铵型
一般都易溶于酸水
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二、理化性质
3、沉淀反应：
1）碘化铋钾（BiI3·KI）
O 2N
2）雷氏盐 NH4[Cr(NH3)2(SCN)4]
3）苦味酸
第五章 各类成分分析
中药分析教研室 王术玲 Tel: 35622505
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第五章 各类成分分析
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生物碱* 皂苷* 黄酮* 蒽醌 挥发油
第五章 各类成分分析
一、概述 二、理化性质
*三、供试品溶液制备（提取、净化） *四、鉴别：理化鉴别、TLC *五、含量测定：总成分、单体成分
士的宁的含量测定： P127 碱化+ CHCl3提取→酸水
提→碱化→CHCl3萃取
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三、供试品溶液的制备
2、氧化铝柱色谱法：
益母草（药典P203）
O
水苏碱的薄层鉴别：
N O
取本品3g → 乙醇回流提取 → 上活 性炭-氧化铝柱 → 乙醇洗脱→收集
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③封尾技术：消除或屏蔽残留—Si-OH
技术1：小分子键合
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技术2：较大空间位阻的 异丙基或异丁基（R基团）
五、含量测定
2、TLCS： 益母草：药典P204
显色，λ=510nm测吸光度 黄连：药典P213
荧光扫描, 激发波长=366nm 士的宁：药典P319
荧光淬灭扫描, λs=254nm
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例：雷氏盐比色法
B + NH4[Cr(NH3)2(SCN)4] = BH[Cr(NH3)2(SCN)4] ↓ 1、在酸性介质中定量反应 2、反应物有颜色，其吸光度取决 于硫氰酸铬铵部分 3、反应物不溶于水，易溶于丙酮
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例：雷氏盐比色法 P71
益母草口服液中生物碱的含量测定