2.2多糖的提取方法
稀碱提取法
0.1-1M氢氧化钠（钾），如几丁质提取用5%氢氧化 钠去杂质。
碱提多糖时易发生美拉德反应，可通过前处理去除小 分子糖、避免pH值处在8-10范围、避免提取温度在 60-80℃。 通氮气或加入硼氢化钠（钾）
2.2多糖的提取方法
微波辅助提取法
利用不同极性的介质对微波 能的不同吸收程度，使基体 物质中的某些区域和萃取体 系中的某些组分被选择性加 热，从而使萃取物质从基体 或体系中分离出来，进入到 介电常数小，微波吸收能力 较差的萃取剂中。
2.2多糖的提取方法 酶法
酶解反应较温和将组织分解，增加多糖的溶出，可较 大幅度提高产率。
常用于除去各种与多糖结合的结合蛋白质。
2.3多糖提取液浓缩
多糖提取液浓缩应尽量在低温下进行，并防止提取物 与氧气接触，防止多糖被氧化，保持原有结构及生物 活性。
吸附法 干葡聚糖凝胶加入提取液中，两者比例为1:5.由于凝 胶吸水，提取液的体积可缩小三倍左右，多糖回收率 达80%。
多糖的分离纯化及结构表征
员工培训 2012-7-31
1、多糖的基本概述
多糖，又称多聚糖，是由10个以上的单糖通过 苷键连接而成的链状聚合物。 (C6H10O5)n， n>10
1、多糖的基本概述
组成分类
同多糖：由一种单糖组成（淀粉、半纤维素、几丁质等） 杂多糖：由两种或两种以上单糖组成（透明质酸、硫 酸软骨素、硫酸皮肤素等）
多糖的表征
1. 无还原性。 2. 大多难溶于水，溶于水后形成胶体溶液。 3. 有旋光性，但没有变旋现象。 4. 无甜味。 5. 在酸或酶的作用下水解成单糖和寡糖。 6. 分子量在数万到数百万之间
1、多糖的基本பைடு நூலகம்述
多糖广泛分布于自然界高等植物、微生物（细菌和真 菌）、地衣、海藻和动物体内。
1、多糖的基本概述
热水浸提法
大多数多糖在热水中溶解度较大且性质稳定。得率应 考虑提取时间、提取次数、溶剂体积、浸提温度、pH 值、醇析浓度和植物颗粒大小等。 水提醇沉是多糖提取最常用方法。
2.2多糖的提取方法
稀酸提取法
1%醋酸 酸性条件引起多糖中糖苷键的断裂，尽量避免在酸性 条件提取多糖。提取时间宜短、提取温度低。
蛋白质在氯仿等有机溶剂变性而不溶于水，将多糖水 溶液、氯仿、正丁醇之比调为25:5:1，混合物剧烈振 摇20到30分钟，蛋白质与氯仿－正丁醇生成凝胶物而 分离，然后离心，分去水层和溶剂层交界处的变性蛋 白质。
效率低，常加入蛋白酶后采用Savage法
2.5脱蛋白
三氟三氯乙烷法
多糖溶液与三氟三氯乙烷等体积混合，低温下搅拌 10min左右，离心得上面水层，水层继续用上述方法 处理几次，即得无蛋白质的多糖溶液。
多糖存在形式： 细胞壁外-胞外多糖 细胞壁内-胞内多糖（大多数多糖） 细胞壁多糖
动植物的细胞大多由脂质包围，用机械粉碎后还必须 脱脂（沙氏提取器，乙醇回流）。 对于含有较多单糖和低聚糖的样品可用热的80%乙醇 处理。
2多糖的提取分离
原料 前处理
提取
滤渣
过滤或离心
滤液
醇沉 沉淀
脱蛋白
脱色
透析
柱层析
多糖
2.2多糖的提取方法
超声辅助法提取法
利用超声波的空化作用产生 的压力造成被破碎物质在瞬 间破碎，加速效成分的浸出 提取，另外超声波的次级效 应，如机械振动、乳化、扩 散、击碎、化学效应等也能 加速欲提取成分的扩散释放 并充分与溶剂混合，利于提 取。
与常规提取方法相比，具有提取时间短、产率高、无 需加热等优点。常用于辅助提取细胞内物质。
愈来愈多的研究发现, 人的生命过程几乎都与糖链有 关:
细胞间通讯、识别和相互作用
细胞的运动和粘附
病原与宿主细胞的作用
糖链携带着生物信息. 它在细胞表面的分子识别过程 中起着决定性作用.
大量研究证明许多多糖具有免疫调节、降血糖、降血 脂、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗病毒和保护胃肠系 统等多种生物活性
2多糖的提取分离
2.3多糖的沉淀
沉淀法是分离生物活性物质的传统方法，在生物活性 物质提取中常用于初步分离。
有机溶剂沉淀法
在提取液中加入与水互溶的有机溶剂，使系统介电常 数减小，多糖溶解度减小而发生沉淀。 常用的有机溶剂有乙醇、甲醇、丙酮等。
2.5脱蛋白
粗多糖中往往混杂着蛋白质、色素、低聚糖等杂质， 必须分别除去。
易挥发，需在低温条件下进行
2.5脱蛋白
三氯醋酸法
在多糖水溶液中滴加5％-30％三氯醋酸，直至溶液不 再继续混浊为止，在5-10℃放置过夜，离心除去沉淀 即得无蛋白质的多糖溶液。
反应较为剧烈，易引起糖降解
2.5脱蛋白
酶解法
在样品溶液中加入蛋白质水解酶，如胃蛋白酶、胰蛋 白酶、木瓜蛋白酶、链霉菌蛋白酶等，使样品中的蛋 白质降解，经透析后得到基本无蛋白和小分子的多糖。
1、多糖的基本概述
单糖组成
类型 五碳糖 六碳糖 己糖胺 糖醛酸 去氧己糖
单糖 D-木糖，L-阿拉伯糖 D-葡萄糖，D-甘露糖，D-半乳糖，L-半乳糖，D-果糖 N-乙酰葡萄糖胺，N-乙酰半乳糖胺 D-葡萄糖酸，D-半乳糖酸，D-甘露糖酸 L-鼠李糖，L-岩藻糖，6-去氧-塔罗糖
1、多糖的基本概述
2.1材料的预处理
根据不同原料性质，对一些样品进行粉碎处理，含脂 高应先脱脂，含色素高需进行脱色，通常采用丙酮、 乙醚、乙醇进行预处理以达到脱脂或脱色的目的。
对于含有较多单糖和低聚糖的样品可用热的80%乙醇 处理。
2.2多糖的提取方法
多糖为非极性大分子化合物，大多采用不同温度的水、 稀碱溶液或氯化钠水溶液做提取溶剂。
多糖的分离纯化主要包括脱蛋白、脱色、脱盐和除去 小分子杂质
2.5脱蛋白
采用醇沉或其它溶剂沉淀所获得的多糖，常混有较多 的蛋白质，脱去蛋白质的方法有多种：如选择能使蛋 白质沉淀而不使多糖沉淀的酚、三氯甲烷、鞣质等试 剂来处理，但用酸性试剂宜短，温度宜低，以免多糖 降解。
2.5脱蛋白
沙维积法（Savage法）
2.3多糖提取液浓缩
超滤法
在一定压力下，小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的薄 膜，而使大分子溶质不能透过，留在膜的一边，从而 使大分子物质得到部分的纯化。
2.3多糖提取液浓缩
透析法 把装有提取液的透析袋埋在吸水力强的聚乙二醇或甘 油中，提取液中水分通过透析袋到吸水剂中，从而达 到浓缩效果。
真空浓缩 通过真空泵抽真空，使水的沸点降低而 从提取液中蒸发出来，而多糖成分不受 破坏。